[發(fā)明專利]一種促凋亡重組卡介苗及其制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410283901.6 | 申請日： | 2014-06-24 |
| 公開（公告）號： | CN104107426A | 公開（公告）日： | 2014-10-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王洪海;徐穎;李光華;劉國元;宋娜;孔聰;黃琪 | 申請（專利權(quán)）人： | 復(fù)旦大學(xué) |
| 主分類號： | A61K39/04 | 分類號： | A61K39/04;A61P31/06;C12N15/74 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陸飛;王潔平 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 促凋亡 重組 卡介苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種促凋亡重組卡介苗，其特征在于，其通過在大腸桿菌—分枝桿菌穿梭質(zhì)粒pMV261中依次插入結(jié)核保護(hù)性抗原Ag85B和促細(xì)胞凋亡基因BAX得到重組質(zhì)粒pMV261—Ag85B—BAX，再將重組質(zhì)粒pMV261—Ag85B—BAX電轉(zhuǎn)入BCG而獲得，記為rBCG::Ag85B—BAX。?
2.一種如權(quán)利要求1所述的促凋亡重組卡介苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）分別PCR擴(kuò)增ag85b和Bax基因；
（2）用同樣的核酸內(nèi)切酶對ag85b和質(zhì)粒pMV261進(jìn)行雙酶切，再用T4?DNA連接酶進(jìn)行連接形成重組質(zhì)粒pMV261—Ag85B；
（3）將步驟（2）獲得的重組質(zhì)粒在進(jìn)行測序正確后，轉(zhuǎn)化，克隆；
（4）抽提步驟（3）獲得的重組質(zhì)粒，用同樣的核酸內(nèi)切酶對Bax和重組質(zhì)粒pMV261—Ag85B雙酶切，再用T4?DNA連接酶進(jìn)行連接形成重組質(zhì)粒pMV261—Ag85B—BAX；
（5）將步驟（4）獲得的重組質(zhì)粒pMV261—Ag85B—BAX通過電脈沖轉(zhuǎn)移系統(tǒng)轉(zhuǎn)入BCG中，形成重組卡介苗rBCG::Ag85B—BAX。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）和步驟（4）中所述核酸內(nèi)切酶是EcoRI和Hind?III。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）和步驟（4）中所述核酸內(nèi)切酶是Hind?III和Sal?I。
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