[發明專利]顆粒阻滯型磁性免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201410283244.5
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN105301239A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 張先恩;王殿冰;田博;張治平
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域。特別涉及一種顆粒阻滯型磁性免疫層析試紙條，及其用途和制備方法。

背景技術

炭疽芽孢桿菌(Bacillusanthracis)是一種可產生芽孢的需氧桿菌，竹節狀排列，為革蘭氏陽性。該菌可引起人畜共患的炭疽病，且在草食性動物中發病率最高，人類通過接觸土壤中、皮毛上的芽孢也可導致感染。由于炭疽芽孢對高溫、高壓、干燥、電離輻射以及一些化學物質具有極強的抵抗能力，故而可在環境中生存數十甚至數百年。因此，炭疽芽孢一直被列為頭號生物戰劑。2001年，發生在美國的炭疽恐怖事件再次讓全世界震驚，無論是自然感染還是生物反恐，在掌握炭疽芽孢桿菌致病機制的同時如何快速準確的檢驗、鑒定炭疽芽孢桿菌是當今人類必須要解決的難題。

針對炭疽芽孢的現有檢測方法包括：利用免疫學技術的酶標法或熒光抗體染色法，利用分子生物學技術的PCR法，以及多種傳統的檢測方法，包括細菌分離培養、溶血性實驗、莢膜染色、噬菌體裂解實驗、串珠實驗等。上述方法耗時較長，而且需要純化工作或購買復雜的儀器，操作繁瑣，多數只能進行定性檢測而不能實驗定量檢測。

磁性免疫層析(MagneticImmuno-chromatographyTesting,MICT)是以膠體金技術為基礎發展出的一種單人份快速定量檢測技術。此免疫層析以超順磁顆粒(superPMPs)代替傳統的標記物進行免疫層析，通過超順磁顆粒捕獲的生化物質來定量判斷樣品中的待測物含量，采用磁標記免疫復合物-磁場強度標準曲線來進行定量測定。該技術與傳統技術相比具有下述優勢：a)比各類目測快速診斷法靈敏10-100倍；b)加樣后30分鐘內可得到數據，且可實現多重檢測；c)在3到4個數量級濃度范圍內呈線性；d)所用磁性檢測儀器采用固相元件，微型化設計自成一體，獨立運行，體積小，操作簡便；e)超順磁顆粒由聚合物包被，不會隨時間而衰變。該技術繼承了傳統免疫層析技術簡便快速、單人份操作的優點，又彌補了傳統免疫層析技術靈敏度低、只能定性不能定量的缺點，從而成為替代傳統免疫層析技術的首選。

利用目前已有的免疫層析技術(包括磁性免疫層析技術)檢測大尺寸的分析物，例如芽孢，都需要較長的層析時間。檢測結果易受外界環境，特別是固體物質的干擾。

發明內容

為了克服上述缺陷，我們以炭疽芽孢桿菌芽孢為例，發展了一種顆粒阻滯型新型磁免疫層析技術。本發明提供顆粒阻滯型磁性免疫層析試紙條及其制備方法，并提供所述試紙條用于定量檢測樣品中的抗原顆粒，比如炭疽芽孢。

具體的，本發明包括以下各項：

1.一種顆粒阻滯型磁性免疫層析方法，其包括以下步驟：

1)混合待測樣品和抗原特異抗體偶聯超順磁顆粒，并孵育；

2)磁分離獲得捕獲的抗原-超順磁顆粒復合體；

3)將捕獲的抗原-超順磁顆粒復合體在樣品墊上展層；

4)讀取結果。

2.根據1所述的方法，其中所述抗原為大小為0.1-20μm的顆粒，優選0.5-2μm的顆粒。

3.根據1所述的方法，其中所述抗原為芽孢，營養體，病毒。

4.根據1所述的方法，其中所述孵育在反應緩沖液中進行，所述展層在展層緩沖液中進行。

5.根據4所述的方法，其中所述反應緩沖液的成分為40mMBS(pH9.7)1％BSA，所述展層緩沖液的成分為10mMPBS(pH7.2)0.5％Tween-201％BSA。

6.根據1所述的方法，其中所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

7.根據1-6任一項所述的方法，其中在步驟4)中通過肉眼直接觀察或檢測光學、磁學信號讀取結果。

8.一種顆粒阻滯型磁性免疫層析試紙條，包括底板、粘附于底板上的硝酸纖維素膜、粘貼在硝酸纖維素膜一端的樣品墊和另一端的吸收墊，其特征在于：所述試紙條不包含結合墊，且硝酸纖維素膜上無捕獲抗體。

9.制備8所述的試紙條的方法，其包括如下步驟：在底板上粘貼硝酸纖維素膜作為第一層，在硝酸纖維素膜一端粘貼樣品墊作為第二層，另一端粘貼吸收墊作為第二層，兩層之間相互交錯2.5mm，組裝完畢后根據需要切割至一定寬度即得到試紙條。

10.8所述的顆粒阻滯型磁性免疫層析試紙條用于定性和/或定量檢測目的抗原的用途。