[發(fā)明專利]一種DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板的系統(tǒng)檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410282616.2
• 申請(qǐng)日: 2014-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN104017894A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗;張細(xì)權(quán);聶慶華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板的系統(tǒng)檢測(cè)方法，其特征在于，步驟如下：

S1.提取待檢基因總RNA；

S2.將步驟S1的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA；

S3.設(shè)計(jì)待檢基因的引物F和引物R；

S4.利用S1核酸酶酶切步驟S2的cDNA，以酶切產(chǎn)物為模板，利用步驟S3的引物F和引物R進(jìn)行PCR，根據(jù)PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果判斷待檢基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA是單鏈還是雙鏈；

S5.如果待檢基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA是單鏈，檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄模板是正鏈或負(fù)鏈的方法如下：

S51.去除步驟S1的RNA中的?DNA后，以步驟S3的引物F或引物R進(jìn)行鏈特異RT-PCR，得到反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA；

S52.以產(chǎn)物cDNA為模板，利用步驟S3設(shè)計(jì)的引物F或引物R，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

S53.步驟S52的PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳，根據(jù)電泳結(jié)果判斷待檢基因的轉(zhuǎn)錄模板是DNA的正鏈還是負(fù)鏈；

所述引物F和引物R分別為待檢基因DNA雙鏈兩端的一段序列，可用于PCR擴(kuò)增出待檢基因序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板的系統(tǒng)檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S4所述根據(jù)PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果判斷待檢基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA是單鏈還是雙鏈的依據(jù)是：如果電泳結(jié)果顯示無(wú)待檢基因產(chǎn)物，則表明待檢基因轉(zhuǎn)錄后的cDNA為單鏈，即待檢基因?yàn)閱蜗蜣D(zhuǎn)錄；如果電泳結(jié)果顯示有待檢基因產(chǎn)物，則表明待檢基因轉(zhuǎn)錄后的cDNA為雙鏈，即待檢基因?yàn)殡p向轉(zhuǎn)錄。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板的系統(tǒng)檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S53所述根據(jù)電泳結(jié)果判斷待檢基因的轉(zhuǎn)錄模板是DNA的正鏈還是負(fù)鏈的依據(jù)是：如果電泳結(jié)果顯示只有引物F反轉(zhuǎn)錄的cDNA具有PCR產(chǎn)物，而引物R無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物，表明待檢基因的轉(zhuǎn)錄模板是DNA的負(fù)鏈；如果電泳結(jié)果顯示只有引物R反轉(zhuǎn)錄的cDNA具有PCR產(chǎn)物，而引物F無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物，表明待檢基因的轉(zhuǎn)錄模板是DNA的正鏈。

4.權(quán)利要求1~3任一所述DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板的系統(tǒng)檢測(cè)方法的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1~3任一所述DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板的系統(tǒng)檢測(cè)方法在制備DNA轉(zhuǎn)錄方向和轉(zhuǎn)錄模板檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。