[發明專利]一種潮汐式生物反應器及其培養百合籽球的方法

有效

• 申請號: 201410282343.1
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN104067937A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 賈文杰;蔣亞蓮;崔光芬;趙培飛;王祥寧;段青;馬璐琳;杜文文;王繼華
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

1.一種潮汐式生物反應器，其特征在于包括營養液儲存容器、培養容器、抽氣泵、定時器、空氣過濾膜、節水閥和加液過濾器，營養液儲存容器與培養容器通過安裝有節水閥的導管相連，所述的營養液儲存容器和培養容器各自分別通過安裝有空氣過濾膜的導管與對應的抽氣泵相連，所述的抽氣泵與定時器相連，所述的培養容器中設有與底面平行的金屬紗網，所述的在營養液儲存容器與抽氣泵之間的導管上設有加液過濾器。

2.基于權利要求1所述的潮汐式生物反應器培養百合籽球的方法，其特征在于包括如下步驟：

A.?將百合籽球中層及內層鱗片作為外植體接入培養基中，1L的培養基含有如下組分：

MS培養基??????????????4.4g??????????

萘乙酸?????????????????0.0～0.1mg/L

6-芐基腺嘌呤????????????1.0～1.5mg/L

蔗糖???????????????????30～60g/L

瓊脂糖??????????????????6g/L

去離子水?????????????????余量

pH?????????????????????5.8～6.0；

將MS培養基、萘乙酸、6-芐基腺嘌呤、蔗糖和瓊脂糖溶于去離子水中，攪拌至混合均勻，并調節pH為5.8～6.0即得培養基；

在光照強度為2000～2500lx，溫度為25±2℃，光照時間為12～14h/d的條件下，進行小籽球誘導和增殖培養，直至外植體萌發分化出0.2～0.4cm的小籽球，切下得百合小籽球；

B．在無菌環境下將下列籽球膨大培養基灌入營養液儲存容器中：1L的籽球膨大培養基含有如下組分：

MS培養基???????????????4.4g??????????

萘乙酸??????????????????0.1～0.2mg/L

6-芐基腺嘌呤?????????????0.5～1.0mg/L

蔗糖????????????????????45～60g/L

去離子水?????????????????余量

pH?????????????????????5.8～6.0；

將MS培養基、萘乙酸、6-芐基腺嘌呤和蔗糖溶于去離子水中，攪拌至混合均勻，并調節pH為5.8～6.0即得籽球膨大培養基；

C.?將A步驟培養得到的百合小籽球作為外植體，在無菌環境下置于培養容器中的金屬紗網上；

D．設置潮汐培養程序：每兩小時浸沒百合小籽球30分鐘，每天12個循環，控制溫度為25±2℃；每天在光照強度為2000～2500?lx的條件下進行16小時光照培養，然后再黑暗培養8小時；潮汐培養30天，每10～15天更換一次培養基，得到潮汐培養小籽球；

E.將D步驟得到的潮汐培養小籽球在無菌環境下取出，人工去葉后再次放入培養容器中，以下列生根培養基替換籽球膨大培養基繼續潮汐培養，每一小時浸沒10分鐘，每10天更換一次培養基，黑暗環境下連續培養20天，出瓶，得到出瓶后的百合籽球；

所述的1L的生根培養基含有如下組分：

MS培養基???????????????4.4g??????????

萘乙酸????????????????0.00～0.05mg/L

蔗糖????????????????????45～60g/L

去離子水?????????????????余量

pH?????????????????????5.8～6.0；

將MS培養基、萘乙酸和蔗糖溶于去離子水中，攪拌至混合均勻，并調節pH為5.8～6.0即得生根培養基；

F.將E步驟得到的出瓶后的百合籽球放入質量濃度為0.1～0.2%的多菌靈溶液中消毒1～2min后，用百合基質包裝，在-1℃冷庫春化85～90天后，下地移栽，然后按常規進行澆水、施肥管理，即得到百合籽球。

3.根據權利要求2所述的潮汐式生物反應器培養百合籽球的方法，其特征在于A步驟中誘導和增殖培養時間為2.5～3.0個月。

4.根據權利要求2所述的潮汐式生物反應器培養百合籽球的方法，其特征在于A步驟所得小籽球是在超凈工作臺中切下的。