[發(fā)明專利]泥螺多肽在抗肺癌中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410277550.8
• 申請(qǐng)日: 2014-06-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105316380B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬劍茵;曹玉昊;胡俊峰;林煥樂(lè);王銑
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江海洋學(xué)院
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K14/435;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/20;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 寧波誠(chéng)源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛(wèi)

本發(fā)明涉及一種泥螺多肽在抗肺癌中的應(yīng)用，尤其涉及泥螺多肽在抗肺癌H1299細(xì)胞藥物的應(yīng)用。利用胰蛋白酶酶解法獲取泥螺多肽粗提物，并且通過(guò)超濾法、凝膠柱分離法以及反相高效液相色譜技術(shù)等分離純化手段獲得各泥螺多肽組分，分別研究各分離組分對(duì)肺癌H1299細(xì)胞的增殖抑制性，研究發(fā)現(xiàn)各組分均能顯著抑制肺癌H1299細(xì)胞增殖，對(duì)H1299細(xì)胞的增殖抑制指數(shù)可達(dá)44.6％以上。本發(fā)明原料成本低，提取條件簡(jiǎn)單溫和，提取的泥螺多肽對(duì)肺癌H1299細(xì)胞增殖抑制效果顯著，為開(kāi)發(fā)以泥螺多肽為原料的抗肺癌藥物提供理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及泥螺酶解多肽的應(yīng)用，具體涉及泥螺多肽在抗肺癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

泥螺(Bullacta exarata)，俗稱“吐鐵”、“黃泥螺”、“梅螺”等，屬軟體動(dòng)物門(mén)、腹足綱、后鰓亞綱、頭楯目、阿地螺科、泥螺屬，為太平洋西岸海水及咸淡水特產(chǎn)的種類，由貝殼和軟體兩部分組成，含有豐富的蛋白質(zhì)、鈣、磷、鐵和維生素等成分，多肽物質(zhì)豐富，在我國(guó)廣泛分布于東海和黃海兩側(cè)的長(zhǎng)江，是一種常見(jiàn)的水產(chǎn)品。

惡性腫瘤是一類嚴(yán)重威脅人類健康和生命的疾病，發(fā)病率越來(lái)越高，目前已有的化療藥物雖對(duì)大多數(shù)腫瘤有一定的療效，但選擇性差、毒副反應(yīng)大、耐藥性等問(wèn)題依然非常明顯。因此，尋找高效、低毒、特異強(qiáng)的抗腫瘤藥物仍勢(shì)在必行。多肽因其分子量小、無(wú)免疫原性、活性高、副作用小，尤其是對(duì)多藥抗性的腫瘤細(xì)胞系也有很好的抑制活性。海洋生物多肽是目前海洋生物活性物質(zhì)研究的一個(gè)重要領(lǐng)域，一些生物活性多肽常以非活性狀態(tài)存在于蛋白質(zhì)中，這些蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)蛋白酶的水解作用，使得隱藏于其中的活性肽釋放出來(lái)，有可能發(fā)揮出比蛋白質(zhì)更多的生物活性。例如：如鄧偉等發(fā)現(xiàn)藻藍(lán)蛋白酶解多肽對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)有明顯的抑制作用；楊永芳等酶解紫貽貝所得的紫貽貝多肽對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞和DU-145細(xì)胞有特異性的增殖抑制作用，并且對(duì)DU-145細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于對(duì)PC-3細(xì)胞的增殖抑制作用；姚如永等研究泥蚶多肽在0.25-1.0g·L^-1范圍內(nèi)，多肽能明顯的抑制肺癌細(xì)胞A549和Ketr-3細(xì)胞的增殖，同時(shí)還能抑制細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，并呈明顯的劑量依賴性。

肺癌是對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一，近年來(lái)許多國(guó)家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。因此，研究泥螺酶解多肽在抗肺癌中的作用，做治療和預(yù)防肺癌具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種泥螺酶解多肽在抗肺癌中的應(yīng)用，尤其是提供對(duì)肺癌H1299細(xì)胞增殖抑制的影響。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：一種泥螺多肽在抗肺癌H1299細(xì)胞藥物中的應(yīng)用，其中藥物的具體實(shí)現(xiàn)形態(tài)可為片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑等。

前述泥螺多肽通過(guò)以下步驟制得：新鮮泥螺洗凈去殼，取泥螺組織搗碎，加入蒸餾水勻漿，料液比為1:(3～4)，勻漿后調(diào)節(jié)勻漿液的pH值為8～9，加入0.4～0.5％勻漿液體積的胰蛋白酶，40～50℃保溫水解7～9h，水解完成后于95～100℃、10～15min進(jìn)行滅酶，4℃下水解液于9500～10000r/min離心15～20min，取上清液濃縮干燥得酶解粗提物，將酶解粗提物溶于蒸餾水，分離純化得各泥螺多肽組分。

所述酶解粗提物的濃度在5～25mg/ml時(shí)，對(duì)H1299細(xì)胞增殖抑制指數(shù)為35.3～70.5％，且增殖抑制指數(shù)與酶解粗提物的濃度呈正相關(guān)。

作為優(yōu)選，所述分離純化步驟為超濾或依次為超濾和凝膠層析或依次為超濾、凝膠層析及反相高效液相色譜。

進(jìn)一步，所述超濾步驟中分別使用10kd、5kd及3kd超濾膜，對(duì)應(yīng)獲得分子量為10～5kd的組分A1，分子量為5～3kd的組分A2以及分子量小于3kd的組分A3，20～25mg/ml組分A3作用于H1299細(xì)胞36h后的增殖抑制率為70～75％，且增殖抑制指數(shù)與組分A3的濃度呈正相關(guān)。