[發明專利]泥螺多肽在抗前列腺癌中的應用

有效

• 申請號: 201410276906.6
• 申請日: 2014-06-20
• 公開（公告）號: CN105194645B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 聞正順;馬劍茵;曹玉昊;林煥樂;胡俊峰
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/20;A61P35/00
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛

1.一種泥螺多肽在制備抗前列腺癌DU-145細胞藥物中的應用，

其特征在于所述泥螺多肽通過以下步驟制得：新鮮泥螺洗凈去殼，取泥螺組織搗碎，加入蒸餾水勻漿，料液比為1:(3～4)，勻漿后調節勻漿液的pH值為8～9，加入0.4～0.5％勻漿液質量的胰蛋白酶，40～50℃保溫水解7～9h，水解完成后95～100℃、10～15min進行滅酶，4℃下水解液于9500～10000r/min離心15～20min，取上清液濃縮干燥得酶解粗提物，將酶解粗提物溶于蒸餾水，經超濾、凝膠層析及反相高效液相色譜分離純化得各泥螺多肽組分，

所述超濾步驟中使用10kd、5kd及3kd超濾膜，分別獲得分子量為10～5kd的組分A1，分子量為5～3kd的組分A2以及分子量小于3kd的組分A3，20～25mg/ml組分A3作用于DU-145細胞36h后的增殖抑制率為77～78％，且增殖抑制指數與組分A3的濃度呈正相關，

所述凝膠層析中對組分A3進行洗脫，分別獲得H1組分、H2組分和H3組分，其中5～20mg/ml組分H2作用于DU-145細胞24h后的增殖抑制指數為為44.1～81.6％，且增殖抑制指數與組分H2的濃度呈正相關；

凝膠層析條件：選用Sephadex G-25凝膠層析，裝柱后用去離子水平衡，濃度為50mg/mL、上樣量為4mL、速度為3ml/min，流動相為超純水，280nm紫外檢測，

采用反相高效液相色譜分離所述H2組分，分離獲得組分F1和F2，其中2.5～3mg/ml組分F1和組分F2作用于DU-145細胞24h后，對DU-145細胞的增殖抑制率分別為31～33.72％和40～42.04％，所述組分F1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述，組分F2的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所述；

反相高效液相色譜條件：選用Zorbax SB-C18(4.6×250，5um)；柱溫為20℃；流動相為1％TFA和乙腈；梯度洗脫：從開始到30min結束，乙腈濃度從0變化到40％，洗脫速度為1.0mL/min；進樣體積為50ul；紫外檢測波長分別為214nm、280nm。

2.如權利要求1所述的泥螺多肽在制備抗前列腺癌DU-145細胞藥物中的應用，其特征在于：所述酶解粗提物的濃度在5～25mg/ml時，對DU-145細胞增殖抑制指數為36.9～80.7％，且增殖抑制指數與酶解粗提物的濃度呈正相關。