[發(fā)明專利]針對食品中的沙門氏菌的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410276257.X
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN105177114B
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李慧;蔡軍;劉洋;石嵩;歐競堃;黃蔚霞
• 申請（專利權(quán)）人: 中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司;中糧集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京信慧永光知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11290
• 代理人: 楊國強;張淑珍

1.一種對食品中的沙門氏菌進行檢測的方法，所述方法包括以下步驟：

a)從所述食品中獲取模板DNA的前處理步驟；

b)使用多重PCR檢測用引物組或包含所述多重PCR檢測用引物組的多重PCR檢測用試劑盒對所述模板DNA進行多重PCR擴增的步驟；

c)對擴增產(chǎn)物進行檢測的步驟，

從而對所述食品中沙門氏菌的存在及含量進行分析，

其中，所述引物組包括如下引物對：

invA基因擴增用引物對：

invA-F:TTGACGAGCTTTATCATTGTCTG；

invA-R:ACGTCTTTTTCTCTTGGTGCC，

以及

hilA基因擴增用引物對：

hilA-F:TGAATTACGCTCACAACACCTG；

hilA-R:TGCTAAGCAACCAGATTACGATG，

并且其中，在步驟b)中，所述多重PCR擴增的反應(yīng)體系為：以總體積為25μL計，加入濃度為1pg/μL～100ng/μL的模板DNA1μL；

所述多重PCR擴增的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性2min；94℃變性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，共進行35個循環(huán)；72℃延伸7min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述多重PCR檢測用試劑盒進一步包含具有如下成分的PCR反應(yīng)基礎(chǔ)溶液：Tris-HCl；KCl；MgCl₂；dATP、dTTP、dGTP及dCTP；以及Taq DNA聚合酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，在所述多重PCR檢測用試劑盒中，各成分以如下濃度包含于25μL的PCR最終反應(yīng)溶液中：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，在所述多重PCR檢測用試劑盒中，各成分以如下濃度包含于25μL的PCR最終反應(yīng)溶液中：

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述多重PCR檢測用試劑盒進一步包含陰性對照DNA和陽性對照DNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述陰性對照DNA來自大腸桿菌菌株CGMCC1.3373，所述陽性對照DNA來自腸炎沙門氏菌菌株CICC 21482。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述方法進一步包括在步驟a)之前對所述食品進行沙門氏菌富集培養(yǎng)的步驟。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述富集培養(yǎng)的步驟采用緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基對所述食品進行沙門氏菌富集培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37±1℃，培養(yǎng)時間為12-15小時。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述前處理步驟為：采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取法或水煮裂解法從所述食品中獲取模板DNA。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取法包括如下步驟：采用OMEGA細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取沙門氏菌的基因組DNA，用NanoDrop 2000超微量分光光度計測定濃度，分裝后備用。