[發明專利]一種蟲草抗菌肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201410276114.9
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104031121A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 周禮紅;高燕燕;丁旭
• 申請（專利權）人: 周禮紅
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12P21/02;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/26;C07K1/18;C12R1/645
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.一種蟲草抗菌肽，其特征在于，所述蟲草抗菌肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.一種根據權利要求1所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟A：將蛹蟲草菌株斜面菌種接入到薩氏瓊脂改良固體培養基中，培養至產生斜面孢子；利用無菌水將得到的所述斜面孢子洗下，并轉接到三角瓶中，振蕩培養，得到孢子懸液；

步驟B：將所述孢子懸液轉接到薩氏液體培養基中，恒溫振蕩培養之后靜置、過濾，得到菌絲體；

步驟C：將所述菌絲體烘干至粉末狀后加入蒸餾水，提取過夜后過濾，得到濾液；

步驟D：將所述濾液進行旋轉蒸發濃縮，并同時加入飽和硫酸銨溶液，靜置后離心，得到第一濃縮液，在所述第一濃縮液中再次加入飽和硫酸銨溶液，得到預定飽和度的第二濃縮液，將所述第二濃縮液離心，得到沉淀樣品，在所述沉淀樣品中加入蒸餾水進行溶解，得到樣品溶解液；將所述樣品溶解液利用蒸餾水透析后冷凍干燥，得到粗蛋白樣品；

步驟E：將所述粗蛋白樣品利用CM-52陽離子交換柱進行洗脫，得到洗脫組份，再將洗脫組份透析后進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，得到13KD的蛋白質條帶；

步驟F:切下所述蛋白質條帶，并進行液質聯用質譜檢測，得到質譜數據，并進行分析，得到蟲草抗菌肽及其序列。

3.根據權利要求2所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，在步驟A中：所述薩氏瓊脂改良固體培養基，按照重量份數計，其有效組份包括：

麥芽糖4-6份、蛋白胨8-12份、酵母膏4-6份、瓊脂18-22份、葡萄糖18-22份、水900-1100份。

4.根據權利要求3所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，在步驟A中：

所述將蛹蟲草菌株斜面菌種接入到薩氏瓊脂改良固體培養基中，培養至產生斜面孢子具體包括：

將蛹蟲草菌株斜面菌種接入到薩氏瓊脂改良固體培養基中，在25℃±1℃培養4-5天。

5.根據權利要求4所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，在步驟B中：

所述孢子懸液與所述薩氏液體培養基的體積比為1:10；

所述恒溫振蕩培養的條件包括：培養溫度為25-27℃，培養時間為4-5天，轉速為180-220r/min；

所述靜置的時間為6-12小時。

6.根據權利要求2-5任一項所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，在步驟C中，具體包括：稱取干燥菌絲體粉末，按質量比為1:8-14的比例加入蒸餾水，并在4℃提取過夜，過濾后，得到所述濾液。

7.根據權利要求6所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，在步驟D中：

所述將所述第二濃縮液離心，得到沉淀樣品具體包括：將所述第二濃縮液靜置后在8000r/min的轉速下離心18-22分鐘，除去上清液，得到所述沉淀樣品。

8.根據權利要求7所述的蟲草抗菌肽的制備方法，其特征在于，在步驟E中的所述SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中：

濃縮膠的濃度為10-16％、分離膠的濃度為4-5％、染色液為考馬斯亮藍R-250。