[發(fā)明專利]一種青春雙歧桿菌細(xì)菌素及其生產(chǎn)方法與專用生產(chǎn)菌株有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410276051.7 | 申請(qǐng)日： | 2014-06-19 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN104046584B | 公開(kāi)（公告）日： | 2017-10-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉國(guó)榮;王成濤;許朵霞;任麗;任桂美 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京工商大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/20 | 分類號(hào)： | C12N1/20;C12P21/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 100048*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 青春 桿菌 細(xì)菌 及其 生產(chǎn) 方法 專用 菌株 | ||
1.青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8，其特征在于，所述的青春雙歧桿菌BL-8保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為BL-8 CGMCC No.7791。
2.一種生產(chǎn)青春雙歧桿菌細(xì)菌素的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
(1)發(fā)酵權(quán)利要求1所述的青春雙歧桿菌；
(2)從發(fā)酵液中提取并純化所述青春雙歧桿菌細(xì)菌素；
所述發(fā)酵的培養(yǎng)基組成為：乳糖2％、胰蛋白胨2％、牛肉膏1％、酵母膏0.5％、磷酸氫二鉀0.2％、檸檬酸二胺0.2％、乙酸鈉0.5％、吐溫80 0.1％、七水合硫酸鎂0.058％、硫酸錳0.025％、玉米漿0.35％、L-半胱氨酸鹽酸0.035％，pH6.5，所述百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分比。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于：發(fā)酵所述青春雙歧桿菌的溫度為37℃，培養(yǎng)時(shí)間為32h。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3任一所述的方法，其特征在于，所述的提取并純化的步驟為：
(1)采用60-80％飽和度硫酸銨從發(fā)酵液中鹽析提取細(xì)菌素粗品；
(2)通過(guò)凝膠過(guò)濾層析或陽(yáng)離子交換樹(shù)脂層析純化，并經(jīng)冷凍干燥得到所述青春雙歧桿菌細(xì)菌素純品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于：所述硫酸銨飽和度為80％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于：所述凝膠過(guò)濾層析的方法參數(shù)為：以Sephadex G-25為凝膠填料，流速0.5mL/min，收集保留時(shí)間為72-80min的蛋白峰，即得所述青春雙歧桿菌細(xì)菌素溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于：所述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂層析的方法參數(shù)為：以SP Sepharose Fast Flow為凝膠填料，用pH5.5的含0-1M NaCl的0.02M醋酸緩沖液在60min內(nèi)進(jìn)行線性梯度洗脫，流速0.8mL/min，收集保留時(shí)間為8-18min的蛋白峰，即得所述青春雙歧桿菌細(xì)菌素溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于：純化后得到的青春雙歧桿菌細(xì)菌素分子量為829.23Da。
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