[發明專利]一種同時檢測人的Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅲ型副流感病毒的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201410275579.2
• 申請日: 2014-06-18
• 公開（公告）號: CN104032035A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 黃芳;崔淑娟;石偉先;王海濱;張玉松;陳萌;于霞麗;李愛華
• 申請（專利權）人: 黃芳
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同時檢測人的I型、II型及III型副流感病毒的方法，其特征在于是含內質控的一步法多重熒光RT-PCR，其特異性引物和探針序列分別為：

1)SEQ?NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

2)SEQ?NO：3、6、9、12所示的探針。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于如SEQ?NO：3所示的人I型副流感病毒的HN基因探針5’端由FAM標記，3’端由BHQ1標記；如SEQ?NO：6所示的人II型副流感病毒的HN基因探針5’端由JOE標記，3’端由BHQ1標記；如SEQ?NO：9所示的人III型副流感病毒的HN基因探針5’端由ROX標記，3’端由BHQ2標記；如SEQ?NO：12所示的內質控基因LDHA基因探針5’端由CY5標記，3’端由BHQ2標記。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述多重熒光RT-PCR的反應體系：

a)反應緩沖液；

b)反應酶；

c)SEQ?NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

d)SEQ?NO：3、6、9、12所示的探針

e)無RNA酶的水補足體系要求的體積。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述多重熒光RT-PCR的反應條件如下：

a)四個熒光通道的設置；

b)反轉錄的溫度與時間；

c)預熱的溫度與時間；

d)熱循環(預熱溫度與時間、退火溫度與時間、熒光收集溫度、循環數)；

e)以界定的Ct值來判定檢測結果。

5.如權利要求1所述方法在檢測食品及原料、環境樣本中I型、II型及III型副流感病毒中的用途。

6.權利要求1所述的引物和探針序列在制備I型、II型及III型副流感病毒的檢測試劑中的應用。

7.一種同時檢測I型、II型及III型副流感病毒的試劑盒，其特征在于所述試劑盒中含有特異性引物和探針，其序列分別為：

1)SEQ?NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

2)SEQ?NO：3、6、9、12所示的探針。

8.權利要求7所述的試劑盒在制備I型、II型及III型副流感病毒的診斷試劑中的應用。