[發(fā)明專利]綠盲蝽唾液蛋白PG10的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410275344.3
• 申請(qǐng)日: 2014-06-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105274073A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-01-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張帥;崔金杰;雒珺瑜;呂麗敏;王春義;李春花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所
• 主分類號(hào): C12N9/26
• 分類號(hào): C12N9/26;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12Q1/68;C12Q1/34;C12R1/84
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.綠盲蝽唾液蛋白PG10在降解果膠中的應(yīng)用，PG10蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.綠盲蝽唾液蛋白PG10在降解植物細(xì)胞壁中的應(yīng)用，PG10蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，綠盲蝽唾液蛋白PG10的制備方法包括以下步驟：

1)綠盲蝽唾液蛋白PG10基因的克隆：分離綠盲蝽唾液腺，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA第一鏈，以cDNA第一鏈為模板，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為1062bp；回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物連接到pMD-TEasy載體上，構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，提取酶切鑒定正確的陽(yáng)性克隆的質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序；

2)重組表達(dá)載體的構(gòu)建：將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物插入pPICZαB載體的EcoRI位點(diǎn)，獲得重組表達(dá)載體pPICZαB-PG10-His；

3)酵母轉(zhuǎn)化及PG10的誘導(dǎo)表達(dá)：將pPICZαB-PG10-His轉(zhuǎn)化入畢赤酵母X-33中，挑取單克隆進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中加入甲醇誘導(dǎo)表達(dá)PG10蛋白，培養(yǎng)結(jié)束后，離心收集上清，用帶His標(biāo)簽蛋白純化柱進(jìn)行PG10蛋白的純化。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟1)中所述引物為：

F：5′-GAAGCTGCAGGAATTTCGGATTACACAATCAAA-3′；

R：5′-CGGCTGGGCCACGTGGCACAGTGGAGTCATTCCGT-3′。

5.綠盲蝽唾液蛋白PG10或其編碼基因在植物抗綠盲蝽唾液腺鑒定技術(shù)中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物包括但不限于棉花。