[發明專利]一種微囊藻毒素的提取方法

在審

• 申請號: 201410274127.2
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104017059A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 聞獻
• 申請（專利權）人: 南京麥思德餐飲管理有限公司
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/14
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 王東升

技術領域

本發明涉及生化分離的技術領域，具體地說，涉及一種微囊藻毒素的提取方法。

背景技術

近年來，由水體富營養化導致的藍藻水華污染已引起全球關注。藍藻水華污染所帶來的主要危害是有毒藍藻向水體中釋放多種不同類型的微囊藻毒素(mi-crocystis，MCs)，其中微囊藻毒素MC-LR和MC-RR是我國富營養化水體中最主要的兩種藻毒素，。MCs是一種公認的肝毒素和促癌劑，長期飲用含有MCs的水會對人的肝臟造成損傷，極端情況下會危及到人的生命。

隨著水華污染問題的深入研究，MCs在環境中的分布、遷移、積累和歸宿等環境行為，以及在環境污染治理方面受到環保工作者的特別關注。到目前為止，對MCs的分布、結構鑒定、含量檢測、毒性評價以及毒性機理等方面已做了大量工作，但MCs純品的缺少成為困擾研究人員對MCs進行深入研究的瓶頸問題之一，因此迫切需要研究一種有效提取、純化MCs的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種以水華新鮮藍藻為原料，通過萃取和大孔樹脂層析提取微囊藻毒素，方法簡單，操作簡便，成本低廉。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種微囊藻毒素的提取方法，包括以下步驟：

步驟一：以天然水華的新鮮藍藻為原料，體積比為65-75%的甲醇溶液為提取劑，磁力攪拌1.5-2小時，超聲20-30分鐘后，離心，取出上清液；

步驟二：將濾渣重復上面的步驟，合并兩次的上清液，去除殘渣；

步驟三：將粗提取液調節PH為7.5-8后過濾，在35-40℃的溫度下蒸出甲醇；

步驟四：將濃縮的粗提液通過0.45μm的微濾膜，即得微囊藻毒素粗品；

步驟五：調節微囊藻毒素粗品的PH值為3-4，將粗品液過D101大孔吸附樹脂柱，流速為3mL/?min，再用體積分數為45%的乙醇洗脫；

步驟六：收集洗脫液，蒸發出乙醇后，再調節PH值為3-4，過D101大孔吸附樹脂柱，流速為3mL/?min，再用體積分數為55%的乙醇洗脫；

步驟七：在6.892min?時收集MC-RR?峰，?15.282min收集MC-LR收集完后，分別收集得到的MC-RR和MC-LR?洗脫液，用旋轉蒸發儀蒸干，再加入乙醇溶解；

步驟八：將得到的MC-RR和MC-LR乙醇溶液，蒸干溶劑，即得產品。

更進一步地，步驟一中的藍藻與甲醇溶液的體積比為1:10-1:20。

更進一步地，步驟一中的磁力攪拌的轉速為：2?000?r/min?-2500?r/min。

更進一步地，步驟一中的離心的條件為：轉速10000r/min-20000r/min，時間5-10分鐘。

有益效果：

本發明方法的技術方案中，原料采用的自然環境水華發生時產生的藍藻，藻粉處理過程簡單，原料成本可以忽略不計，操作過程中采用的操作相對簡單，藻粉的預處理對實驗人員要求較低；

用傳統的反相C18填料作為固相萃取相分離純化ＭＣｓ，雖然可以得到純度較高的MCs，但因為上柱量和流速的限制無法得到大量提純的MCs供使用，經過2次大孔吸附樹脂純化后的MCs，雖然純度在70%～85%之間，但可以獲得大量的MCs，從而滿足MCs的各種環境化學行為實驗的需要；

由于提純量大，相比較甲醇，采用不同濃度乙醇作為洗脫液在具體操作中更加安全、方便；本發明的方法提純MCs具有成本低、操作安全、直觀簡便等優點。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步詳細的說明。

實施例

一種微囊藻毒素的提取方法，包括以下步驟：

步驟一：以天然水華的新鮮藍藻為原料，體積比為65-75%的甲醇溶液為提取劑，磁力攪拌1.5-2小時，超聲20-30分鐘后，離心，取出上清液；

步驟二：將濾渣重復上面的步驟，合并兩次的上清液，去除殘渣；

步驟三：將粗提取液調節PH為7.5-8后過濾，在35-40℃的溫度下蒸出甲醇；

步驟四：將濃縮的粗提液通過0.45μm的微濾膜，即得微囊藻毒素粗品；

步驟五：調節微囊藻毒素粗品的PH值為3-4，將粗品液過D101大孔吸附樹脂柱，流速為3mL/?min，再用體積分數為45%的乙醇洗脫；

步驟六：收集洗脫液，蒸發出乙醇后，再調節PH值為3-4，過D101大孔吸附樹脂柱，流速為3mL/?min，再用體積分數為55%的乙醇洗脫；