[發(fā)明專利]一種用于檢測豬瘟病毒感染的報告細胞系

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410273857.0
• 申請日: 2014-06-19
• 公開（公告）號: CN104017904A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任林柱;陳福旺;楊鑫;歐陽紅生;逢大欣
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種用于檢測豬瘟病毒感染的報告細胞系，其特征在于：該細胞在PK-15細胞的基礎(chǔ)上插入了CSFV特異識別的氨基酸序列、GFP熒光淬滅序列以及GFP蛋白。

2.?一種真核表達報告載體pEGFP-linker-quench，其特征在于：

在pEGFP-C1載體的基礎(chǔ)上，插入SEQ?No.1的人工合成的DNA片段而成。

3.?權(quán)利要求1所述的用于檢測豬瘟病毒感染的報告細胞系的制備方法，包括以下步驟：

1）人工合成DNA片段

5-agatctacagaaacagaaacagaaacagaaacagaaacagaattgaaggagctagctcagggggataagctttgcaac?gattcaagtgatcctcttgttgttgccgcaagtatcattgggatcttgcacttgatattgtggattcttgatcgtcttggatcc-3，

其中，劃線部分分別為Bgl?II和BamHI酶切位點；

2）真核表達報告載體pEGFP-linker-quench的構(gòu)建

將上述合成的DNA片段經(jīng)Bgl?II和BamHI雙酶切后，連接到真核表達載體pEGFP-C1的相應(yīng)酶切位點上，構(gòu)建成真核表達報告載體pEGFP-linker-quench；

3）豬瘟病毒感染的報告細胞系的建立及鑒定

將上述構(gòu)建的真核表達報告載體pEGFP-linker-quench用AseI酶切線性化，用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染到PK-15細胞中，對經(jīng)抗性篩選獲得的陽性細胞進行PCR法及熒光顯微鏡鑒定，對鑒定正確的陽性細胞進行凍存。

4.?權(quán)利要求1所述用于檢測豬瘟病毒感染的報告細胞系的PCR鑒定方法，其特征在于：

所用引物序列為：

GFP1：5-tatggatccatggtgagcaagggcgag-3；

GFP2：5-tatggtaccttacttgtacagctcgtcca-3。