[發(fā)明專利]用于檢測非酒精性脂肪肝的血清miRNA標(biāo)志物組合及應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410273783.0
• 申請(qǐng)日: 2014-06-18
• 公開（公告）號(hào): CN104293908A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚友文;潘騰莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鎮(zhèn)江市第三人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 鎮(zhèn)江京科專利商標(biāo)代理有限公司 32107
• 代理人: 夏哲華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于區(qū)分非酒精脂肪肝與正常人的血清miRNA標(biāo)志物組合及應(yīng)用。?

背景技術(shù)

非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic?fatty?liver?disease，NAFLD)是指除外過量飲酒和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征。大量流行病學(xué)研究表明，NAFLD己成為一種呈現(xiàn)全球化趨勢的常見慢性肝病。隨著肥胖及其相關(guān)代謝紊亂的增多，近10余年來我國NAFLD患病率增長迅速。肝組織學(xué)檢查仍然是診斷NAFLD的金標(biāo)準(zhǔn)，但肝穿刺的副作用以及局限性往往制約了這項(xiàng)診斷技術(shù)的開展。因此，尋找新的診斷標(biāo)志物、新的診斷模型一直是研究熱點(diǎn)。新的非創(chuàng)傷性手段主要集中在兩個(gè)方面，一是尋找新的血清標(biāo)志物，二是尋找新的影像學(xué)診斷依據(jù)。近二十年來，如Steatotest，包含了12個(gè)變量因素如α2-巨球蛋白，觸珠蛋白和載脂蛋白A1等，2006年Bedogni等發(fā)布的脂肪肝指數(shù)(Fatty?Liver?Index，F(xiàn)LI)，以及近年的脂肪肝分?jǐn)?shù)(NAFLD?Liver?Fat?Score)等包含了胰島素抵抗，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和AST/丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)等指標(biāo)。這些模型的共同點(diǎn)是現(xiàn)有已知可能與NAFLD有關(guān)指標(biāo)的組合。還有在影像學(xué)方面主要是Firbroscan等依靠肝臟硬度而開發(fā)的儀器。這些模型和儀器在NAFLD的應(yīng)用方面發(fā)揮了較好的價(jià)值。但有各有其不足，如特異性不強(qiáng)、敏感性不夠等均制約了其應(yīng)用。?

miRNA(microRNA)是一類內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，長度為18～24個(gè)核苷?酸。miRNA普遍存在于人類的體液中，性質(zhì)穩(wěn)定，可以定量檢測，且存在顯著的疾病特異性。近年的研究表明，血液、唾液、尿液、乳汁及腦脊液等體液miRNA檢測可應(yīng)用于妊娠等生理狀態(tài)的判斷以及腫瘤、感染、代謝及阿爾海默茨病等疾病的診斷和預(yù)后判斷。體液特異性miRNA檢測的臨床意義及應(yīng)用前景已引起高度關(guān)注，miRNA作為一類非編碼調(diào)節(jié)性的小分子RNA有可能取代傳統(tǒng)的特異蛋白為代表的生物標(biāo)志物。體液miRNA含量豐富且性質(zhì)穩(wěn)定，具備成為優(yōu)異生物標(biāo)志物的潛質(zhì)，并且擁有以蛋白質(zhì)為代表的傳統(tǒng)生物標(biāo)志物不具備的特性，無需抗體制備且易于精確定量，可能克服抗原抗體類生物標(biāo)志物的制備瓶頸。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種能夠用于非酒精性脂肪肝的早期發(fā)現(xiàn)以及進(jìn)行快速的無創(chuàng)性檢測的血清miRNA標(biāo)志物組合及應(yīng)用。?

本發(fā)明包括以下技術(shù)方案：?

本發(fā)明的用于檢測非酒精性脂肪肝的血清miRNA標(biāo)志物組合包括下列四種has-miRNA：hsa-miR-122-5p,hsa-miR-1290,hsa-miR-27b-3p?and?hsa-miR-192-5p。?

本發(fā)明的用于檢測非酒精性脂肪肝的miRNA探針組合，包括以下序列：SEQ?ID?N0.1、SEQ?ID?N0.2、SEQ?ID?N0.3、SEQ?ID?N0.4。?

上述用于檢測非酒精性脂肪肝的miRNA探針組合在制備檢測非酒精性脂肪肝的試劑中的應(yīng)用。?

本發(fā)明的用于檢測非酒精性脂肪肝的試劑盒，包括上述用于檢測非酒精性脂肪肝的miRNA探針組合，還包括Taq酶、氯化鎂和PCR緩沖液。?

本發(fā)明的權(quán)利要求用于檢測非酒精性脂肪肝的miRNA引物組合是基于下列核酸序列，包括以下序列：SEQ?ID?N0.1、SEQ?ID?N0.2、SEQ?ID?N0.3、SEQ?ID?N0.4。?

本發(fā)明權(quán)利要求用于檢測非酒精性脂肪肝的試劑盒，包括上述用于檢測非酒精性脂肪肝的miRNA引物組合，還包括Taq酶、氯化鎂和PCR緩沖液。?

本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)非酒精性脂肪肝的早期發(fā)現(xiàn)以及迅速的無創(chuàng)性檢測。?

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例的兩組mappable?reads數(shù)據(jù)及長度分析圖；?

圖2訓(xùn)練集NAFLD六種miRNA與正常對(duì)照組的比較；?

圖3六種miRNA在訓(xùn)練集ROC曲線下面積；?

圖4miRNA組合在訓(xùn)練集和驗(yàn)證集ROC曲線下面積；?

圖5miRNA組合在不同NAFLD活動(dòng)指數(shù)中的應(yīng)用；?

圖6miRNA組合與ALT的ROC曲線下面積；?

圖7miRNA組合與單一miRNA的ROC曲線下面積。?

具體實(shí)施方式

研究對(duì)象?