[發明專利]一種信號放大技術電化學傳感器檢測DNA的方法

有效

• 申請號: 201410272431.3
• 申請日: 2014-06-18
• 公開（公告）號: CN104020198A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 混旭;柏莉;劉芳;徐長旺
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于分析化學和電化學技術領域，涉及一種信號放大技術電化學傳感器制備方法及應用。另外，本發明還涉及采用所述的電化學傳感器檢測DNA的方法。?

背景技術

檢測特定序列DNA在臨床診斷、基因治療以及其他生物醫學研究上是十分重要的。因此，建立高靈敏度快速檢測特定序列的DNA的方法是十分必要的。?

一般情況下，檢測DNA都是基于DNA雜交來實現的。為了讀出雜交反應，通常的方法是對目標DNA的部分互補序列進行標記。一般采用熒光、電化學發光、化學發光物質等標記目標DNA的部分互補序列制得DNA探針，根據雜交反應后DNA探針的信號強度測定目標DNA的濃度。然而，由于生物體系中目標DNA的濃度極低，必須采用適當的檢測方法提高傳感器的靈敏度。因此，一些基于信號放大的DNA檢測方法得到了發展：酶切循環信號放大技術[Hun?X.,Liu?F.,Mei?Z.H.,et.al.,Signal?amplified?strategy?based?on?target-induced?strand?release?couplingcleavage?of?nicking?endonuclease?for?the?ultrasensitive?detection?of?ochratoxin?A,Biosensors?and?Bioelectronics,2013,39,145-151]，滾環放大技術[Wen?Y.Q.,Xu?Y.,Mao?X.H.,et.al.,DNAzyme-Based?Rolling-Circle?Amplification?DNA?Machine?for?Ultrasensitive?Analysis?of?MicroRNA?in?Drosophila?Larva,Anal.Chem.2012,84,7664-7669]，聚合酶鏈反應[Hartman?M.R.,Yang?D.Y.,Tran?T.N.N.,et.al.,Thermostable?branched?DNA?nanostructures?as?modular?primers?for?polymerase?chain?reaction,Angewandte?Chemie?International?Edition,2013,52,8699–8702]，環介導等溫擴增[Dhama?K.,Karthik?K.,Chakraborty?S.,et.al.,Loop-mediated?isothermal?amplification?of?DNA(LAMP):A?new?diagnostic?tool?lights?the?world?of?diagnosis?of?animal?and?human?pathogens:A?review,Pakistan?Journal?of?Biological?Sciences,2014,17,151-166]等。這些方法各有其優點，能不同程度的滿足對DNA的檢測要求，但靈敏度不高。所以必須發展一種靈敏度高，簡單，穩定的檢測方法。?

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種信號放大技術電化學傳感器制備方法及應用。以及提供一種采用所述的電化學傳感器檢測DNA的方法。?

本發明的目的是這樣實現的：?

本發明是通過以下措施來實現的：一種信號放大技術電化學傳感器制備方法，其特征是包括以下步驟：?

(1)金-鉑納米粒子的制備；?

(2)電化學探針的制備；?

(3)電化學傳感器的制備；?

本發明所述的金-鉑納米粒子的制備包括以下步驟：把制備和儲備金膠溶液所用的玻璃容器(容量瓶、棕色廣口瓶、圓底燒瓶)用王水泡30min，然后用二次水沖洗烘干備用；在1000mL圓底燒瓶中加入50mL1mM的HAuCl₄，攪拌加熱至沸騰，然后快速加入5mL38.8mM的檸檬酸鈉(NaC₆H₅O₇)，溶液變為酒紅色時，向溶液中依次加入5mL4.0×10^-3molL^-1的HPtCl₆，15mL10gL^-1的PVP，攪拌加熱至沸騰后繼續加熱2h。溶液由酒紅色變為棕褐色，制得Au@PtNPs(金-鉑納米粒子)，轉移至棕色瓶，4℃儲存備用。?