[發(fā)明專利]慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410271759.3
• 申請(qǐng)日: 2014-06-18
• 公開（公告）號(hào): CN104000834A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周杰;葛明;王營
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 周杰
• 主分類號(hào): A61K31/704
• 分類號(hào): A61K31/704;A61K31/505
• 代理公司: 濟(jì)南智圓行方專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37231
• 代理人: 劉爾才

1.慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括以下步驟：

(1)取清潔級(jí)成年雄性SD大鼠，將大鼠置于凈化籠中，溫度為19-23℃，相對(duì)濕度40％-50％，自然采光，以大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料進(jìn)行飼喂，自由飲水；

(2)適應(yīng)性飼喂1周后，以每日所給飼料重量的0.1％-0.3％的阿霉素進(jìn)行灌胃；并以2-5mg/kg進(jìn)行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周1次；連續(xù)6周即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述阿霉素以每日所給飼料重量的0.2％進(jìn)行灌胃；丙基硫氧嘧啶以3.5mg/kg進(jìn)行腹腔注射，每周1次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型，其特征在于，所述動(dòng)物模型建模完成后，采用以下評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行評(píng)價(jià)：左室射血分?jǐn)?shù)、左室內(nèi)徑縮短率、心率；心肌病理切片、心重指數(shù)；呼吸頻率、肺重指數(shù)、肺臟病理切片；尿量；肝重指數(shù)、肝臟病理切片；力竭性游泳試驗(yàn)；耳溫、血清BNP、T3、T4、TSH；上述評(píng)價(jià)指標(biāo)均采用盲法檢測；

所述評(píng)價(jià)的具體方法如下：

(1)在建模前、后分別測量大鼠左室射血分?jǐn)?shù)、左室內(nèi)徑縮短率、心率、呼吸頻率、尿量、耳溫和力竭性游泳實(shí)驗(yàn)；

(2)建模結(jié)束后，腹主動(dòng)脈取血后，分離血清，并在-80℃的條件下保持，剖取心臟、肺臟、肝臟，洗去殘血，濾紙吸干，稱量后計(jì)算出心重指數(shù)、肺重指數(shù)、肝重指數(shù)；

(3)取少量左室肌、肺臟、肝臟標(biāo)本，福爾馬林固定，HE染色后，采用盲法在顯微鏡下觀察并鑷片，通過ELISA法檢測血清BNP、T3、T4、TSH；

若與建模前相比，建模后大鼠左室射血分?jǐn)?shù)減少率大于等于50％，左室內(nèi)徑縮短率減少率大于等于50％，心率增加量大于等于50次/分，呼吸頻率增加量大于等于20次/分，尿量減少量大于等于4ml/24h，耳溫降低量大于等于0.5℃，力竭性游泳試驗(yàn)的時(shí)間減少量大于等于55min；

若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L，T3含量小于等于43.5ng/ml，T4含量小于等于60ng/ml，TSH含量大于等于25ng/ml；

若建模后，心重指數(shù)至少為5.5g/kg、肺重指數(shù)至少為5.5g/kg、肝重指數(shù)至少為30g/kg；

同時(shí)滿足上述條件，則慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證的動(dòng)物模型建模成功。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型，其特征在于，所述左室射血分?jǐn)?shù)、左室內(nèi)徑縮短率均采用Teichholz法測量；心率采用無創(chuàng)套尾法監(jiān)測。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型，其特征在于，所述呼吸頻率的測量方法為上午8-10點(diǎn)熟睡時(shí)，記錄20s呼吸次數(shù)，最終結(jié)果乘以3。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型，其特征在于，所述尿量的檢測方法為：統(tǒng)一灌胃5ml水后，收集24小時(shí)代謝籠尿液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動(dòng)物模型，其特征在于，所述力竭性游泳的方法為：大鼠連續(xù)反復(fù)下沉，沉入水下三次，每次超過5s時(shí)間，至力竭為止，統(tǒng)計(jì)游泳的總時(shí)間。