[發(fā)明專利]美國白蛾恒溫核酸檢測試劑盒及其檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410271083.8 | 申請日： | 2014-06-18 |
| 公開（公告）號： | CN104099413A | 公開（公告）日： | 2014-10-15 |
| 發(fā)明（設計）人： | 詹國輝;鄭斯竹;陳景云;葛華林 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州市外來有害生物防控技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 賀翔 |
| 地址： | 215121 江蘇省蘇州*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 美國 恒溫 核酸 檢測 試劑盒 及其 方法 | ||
1.一種美國白蛾核酸的恒溫檢測試劑盒，其特征在于，組成包括：
（1）美國白蛾核酸恒溫擴增反應液；
（2）DNA檢測裝置；
（3）陽性對照：為含有美國白蛾線粒體COI基因的DNA片段；
（4）陰性對照：為無菌雙蒸水；
其中，美國白蛾核酸恒溫擴增反應液的組成為：0.01～0.05μmol正向外圍引物；0.01～0.05μmol反向外圍引物；0.01～0.05μmol反向交叉引物；0.1～0.5μmol正向探針；0.1～0.5μmol反向探針；3～6mmol?MgSO4；0.2～0.4mmol?dNTPs溶液；6～10U?Gst?DNA聚合酶；2μL?Betaine（5M）；2μL?10×Thermol?buffer；無菌雙蒸水補足到18μL；
正向外圍引物序列為：AGCAGGAACTGGATGAACA；反向外圍引物序列為：GTATGGTAATAGCTCCAGC；反向交叉引物序列為：ATTACTACAATCATTAACATACGATTTTCCTACTGCTCATACGAA；正向探針為5’端標記Biotin序列：ATTACTACAATCATTAACATACGATT；反向探針為5’端標記FitC的序列：AATTTATCATTTGATCAAATACCT。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美國白蛾核酸的檢測試劑盒，其特征在于：所述美國白蛾核酸恒溫擴增反應液的組成為：0.03～0.05μmol正向外圍引物；0.03～0.05μmol反向外圍引物；0.03～0.05μmol反向交叉引物；0.3～0.5μmol正向探針；0.3～0.5μmol反向探針；5～6mmol?MgSO4；0.3～0.4mmol?dNTPs溶液；8～10U?Bst?DNA聚合酶；2μL?10×Thermol?buffer；無菌雙蒸水補足到18μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的美國白蛾核酸的檢測試劑盒，其特征在于：所述DNA檢測裝置為全封閉式靶核酸擴增物快速檢測裝置，所使用的試紙條為用于核酸擴增物檢測的試紙條。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美國白蛾核酸的檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照的含有美國白蛾線粒體COI基因的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。
5.一種權(quán)利要求1所述美國白蛾核酸的檢測試劑盒的檢測美國白蛾的方法，其特征在于，具體步驟為：
a）使用常規(guī)DNA提取方法從待檢測的標本中提取DNA樣品；
b）將步驟a）提取得到的DNA樣品作為模板加入到裝有恒溫擴增反應液的PCR管中，在60～65℃下擴增反應60～65分鐘，對照PCR管中分別加入標準陽性模板和標準陰性模板；
c）將反應后的PCR管放置到核酸防污染檢測裝置中進行檢測，15分鐘以后判讀結(jié)果。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的美國白蛾核酸的檢測試劑盒的檢測美國白蛾的方法，其特征在于，步驟b）中，在63℃下擴增反應60分鐘。
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