[發明專利]用于檢測人類紅細胞ABO血型基因分型的引物組及試劑盒

無效

• 申請號: 201410271048.6
• 申請日: 2014-06-18
• 公開（公告）號: CN104004854A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 趙衛軍;李勁松;馬靜
• 申請（專利權）人: 天津市秀鵬生物技術開發有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種用于檢測人類紅細胞ABO血型基因分型的試劑盒（PCR-SSP法）。

背景技術

人類ABO基因座位于第9號染色體（9q34），且A、B、O基因高度同源性，有7個外顯子。ABO基因長度約1060bp，編碼353個氨基酸。A基因和B基因編碼糖基轉移酶，而O基因為無效基因。B基因與A基因在cDNA序列第297、703、796和803bp這4個堿基位點存差異；O基因與A基因的區別為cDNA第261bp堿基G缺失。A型主要有A1與A2亞型，此外還有A3、Am和Ax等。與A1基因比較，A2基因在cDNA第467bp存在A/T替換和第1061bp堿基C缺失。O型主要有O1與O2亞型。與O1基因比較，O2基因除了第261bp堿基G缺失外，還存在第646T>A、681G>A、771C>T和829G>A等4個堿基替換。

ABO基因的基因產物是糖基轉移酶，這些酶控制ABO血型抗原的合成。ABO抗原的化學結構是糖蛋白，A基因表達A酶（α-3-N-D-氨基半乳糖轉移酶），能夠將N-乙酰半乳糖加在H物質的巖藻糖末端上，產生A抗原特異性；B基因表達B酶（α-3-D-半乳糖基轉移酶），能將半乳糖加在H物質糖末端產生B抗原特異性。AB型個體帶有A和B兩種糖基轉移酶，因此紅細胞上同時有A和B抗原。O型個體不具有A酶和B酶，所以紅細胞表面不顯示A和B抗原。血清學方法通?？繖z測紅細胞表面抗原和血液中存在的抗體來鑒定ABO血型，而ABO血型的基因學分型方法則通過直接檢測ABO基因對其進行分型。

ABO血型系統是人類血型系統中免疫原性最強的血型系統，在輸血醫學以及器官、干細胞移植等臨床醫學中有重要作用。血清學技術鑒定ABO血型系統只能鑒定表型，在鑒定異常表達的個體和作遺傳學分析時受到局限。ABO血型基因分型技術在輸血醫學中可結合血清學診斷結果應用于臨床，ABO基因分型結果可作為遺傳標記物應用于干細胞移植后嵌合體檢測及亞型的家系研究。此外，ABO血型基因分型技術不受檢材限制，羊水、毛發等包含有核細胞的物質都可作為檢材，使其在胎兒和新生兒血型鑒定方面有潛在而廣泛的應用價值。當患者由于疾病或衰老，ABO基因產物表達降低，造成A，B抗原表達減弱時，基因分型技術因其不受表達影響的優勢成為ABO血型準確定型的首選。不受血清中自身抗體、不規則抗體的影響，ABO血型基因分型技術克服了血清學方法的種種限制，是正確判定血型不可缺少的輔助手段，具有廣泛的應用前景和臨床參考價值。

發明內容

本發明的目的是：克服現有技術中的不足，提供一種適合中國人群的用于檢測人類紅細胞ABO血型基因的引物組。

本發明的第二個目的是提供一種適合中國人群的具有靈敏、特異、經濟、簡便、快速的用于檢測人類紅細胞ABO血型基因的試劑盒。

一種適合中國人群的用于檢測人類紅細胞ABO血型基因的引物組，其特征是包括ABO?INTRON2?396G引物對，ABO?INTRON2?396C引物對，ABO?EXON7?272A引物對，ABO?EXON7?272T引物對，ABO?EXON7?429C引物對，ABO?EXON7?429G引物對，ABO?EXON7?635G引物對，ABO?EXON7?635A引物對，ABO?EXON6?22A引物對，ABO?EXON7?688G引物對，ABO?EXON7?688C引物對及內參引物對；

所述ABO?INTRON2?396G位于Intron2?520-537和Intron2?347-369的引物對的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列；

所述ABO?INTRON2?396C位于Intron2?520-537和Intron2?347-369的引物對的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列；

所述ABO?EXON7?272A位于EXON7455-472和EXON7?253-272的引物對的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列；

所述ABO?EXON7?272T位于EXON7455-472和EXON7?253-272的引物對的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列；

所述ABO?EXON7?429C位于EXON7?202-221和EXON7?429-446的引物對的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列；