[發明專利]一種用碳納米管微懸臂梁生物傳感器檢測血小板衍生化生長因子濃度為0.5-10微克/毫升的方法

有效

• 申請號: 201410270034.2
• 申請日: 2014-06-18
• 公開（公告）號: CN104089842A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 李桂銀;周治德;梁晉濤;黃勇;馬龍飛;管明源;黃國銀
• 申請（專利權）人: 桂林電子科技大學
• 主分類號: G01N5/00
• 分類號: G01N5/00;G01N33/53
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 盧玉恒

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，尤其涉及一種用微懸臂梁生物傳感器檢測PDGF的方法。?

技術背景

血小板衍化生長因子(plateler-derived?growth?factor,?PDGF)?作為血管生成因子之一，與腫瘤的發生發展有密切關系，被認為是一種潛在的具有臨床意義的腫瘤標志物。目前PDGF檢測方法很多，主要有酶聯免疫分析法、免疫組織化學法等。其檢測方法操作復雜，靈敏度不高，難以實現在腫瘤早期階段對PDGF的高靈敏檢出，且無法滿足快速檢測的需求。“nanomechanical?microcantilever?oprerated?in?vibratin?modes?with?use?of??RNA?aptamer?as?a?receptoe?molecules?for?label-free?detection?of??HCV?helicase”，Kyo?Seon?Hwang?et?al.，Biosensors?and?Bioelectrontics，第23卷第459-465頁，20070602，公開了一種用核酸適配體作為受體分子通過微懸臂梁的振動模式來檢測HCV解旋酶的方法。發明專利申請CN101935008A公開了一種利用功能化碳納米管為敏感材料的微懸臂梁傳感器的方法。PDGF常規濃度為0.5-10μg/mL，目前需要建立一種PDGF濃度為0.5-10μg/mL的快速、靈敏、操作簡便的檢測方法。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種快速準確，PDGF濃度檢測范圍為0.5-10μg/mL的PDGF的測定方法。?

為了解決上述技術問題，本發明通過構建一種碳納米管微懸臂梁生物傳感器來實現PDGF的檢測。該碳納米管微懸臂梁生物傳感器包括支架、基底材料、碳納米管、拾取電路；其中基底材料固定在支架一側構成微懸臂梁結構，采用低壓化學氣相沉積法（LPCVD），將碳納米管生長在基底材料的上面，拾取電路在基底材料的下面，在碳納米管上面通過π-π疊加作用修飾有一層核酸適配體。?

本發明用的碳納米管微懸臂梁生物傳感器的制備步驟如下：?

1、微懸臂梁結構的制造

微懸臂梁是將半導體材料硅為基底材料2，加工成微懸臂梁結構。

2、拾取電路4的制作?

拾取電路是在基底材料2下表面利用微電子工藝制作硅壓敏電阻，將四個壓敏電阻連接成惠斯通電橋形式。

3、懸臂梁生長和涂敷碳納米管工藝?

對前述步驟中的基底材料2的上表面進行清洗處理，分別用丙酮、無水乙醇、去離子水進行超聲波清洗，然后用低壓化學氣相沉積法（LPCVD）生長碳納米管。用LPCVD法生長碳納米管質量穩定，不易移位、變形，有利于后面工序將核酸適配體通過π-π疊加作用修飾在碳納米管上，形成穩定的檢測探針。

4、碳納米管微懸臂梁上核酸適配體的修飾?

將核酸適配體通過π-π疊加作用修飾在碳納米管上，形成一種能特異性識別PDGF的檢測探針，從而構建完成碳納米管微懸臂梁生物傳感器。通過π-π疊加作用修飾，使得核酸適配體在碳納米管上不容易流失，和LPCVD法生長碳納米管一起作用，便于后序步驟中PDGF與核酸適配體形成的復合物在微懸臂梁上的質量效應穩定，從而引起微懸臂梁諧振頻率變化的穩定，為實現PDGF的檢測濃度范圍為0.5-10μg/mL打下基礎。

本發明對PDGF檢測的步驟如下：?

（1）在碳納米管微懸臂梁上先制作含有PDGF核酸適配體的檢測探針；

（2）將檢測探針放入待測樣本中，待測樣本中PDGF的濃度范圍為：0.5-10μg/mL，PDGF通過特異性反應與檢測探針上的核酸適配體形成復合物并附著在微懸臂梁上；

（3）所形成的復合物的質量大小與待測樣本中PDGF的濃度呈正相關；

（4）所述復合物在微懸臂上產生的質量變化引起微懸臂梁撓曲位移或諧振頻率的變化，從而實現對PDGF的檢測。

附圖說明

圖1是檢測PDGF用的碳納米管微懸臂梁生物傳感器示意圖。?

本發明的優點和特點?