[發明專利]一種推斷人體死后間隔時間的方法

有效

• 申請號: 201410269524.0
• 申請日: 2014-06-17
• 公開（公告）號: CN104087660B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 李長雷;楊友華;易卉玲;舒細記
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司11138
• 代理人: 徐立

技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域，特別涉及一種推斷人體死后間隔時間的方法。

背景技術

人體死后間隔時間(postmortem interval，PMI)推斷一直是法醫病理學研究的重點、難點和熱點之一，尤其早期PMI的推斷，在刑事偵查中排查犯罪嫌疑人、仲裁死亡醫療糾紛等司法實踐中更具現實意義。客觀、準確的早期PMI推斷，可為公安機關刑事偵查提供重要的客觀線索，有利于公安機關辨別犯罪嫌疑人是否有作案時間，確定或縮小偵查范圍，提高偵查效率和準確度。此外，死后間隔時間的推斷有時對自然災害的評估分析、保險和財產繼承也至關重要。

DNA是具有顯著生化穩定性的遺傳物質，同物種不同組織的體細胞的DNA含量是恒定的。在機體死亡后，細胞組織發生缺血、缺氧，隨著氧自由基生成增多，細胞自身消化，其結構進行解體，DNA也逐漸發生降解，其DNA的含量及細胞核的形態變化亦具規律性，表現為核凝固、邊集、碎裂、溶解等改變。研究人員在研究死后間隔時間時，其研究對象均為腦細胞、脾細胞或肝細胞，且研究人員均認為僅在腦細胞、脾細胞或肝細胞中的DNA能夠準確反映死后間隔時間。

發明內容

為了解決現有技術中沒有針對膽囊反映死后間隔時間的問題，本發明實施例提供了一種推斷人體死后間隔時間的方法。所述技術方案如下：

本發明提供了一種推斷人體死后間隔時間的方法，所述方法包括：

提取不同死亡時間的人的膽囊粘膜上皮細胞作為樣本，并將所述樣本涂片；

將涂片后的所述樣本進行染色；

對染色后的所述樣本進行圖像分析，所述分析的參數包括：所述膽囊粘膜上皮細胞的細胞核的異形指數、灰度參數和幾何參數，所述灰度參數包括平均光密度、平均灰度和積分光密度；

將所述參數進行統計，獲得所述參數的線性回歸方程，所述線性回歸方程為：

Y_ID＝11.333X_ID-33.338，其中，Y_ID為推斷的死后間隔時間，X_ID為對應測量的異形指數；

Y_AG＝0.679X_AG-54.277，其中，Y_AG為推斷的死后間隔時間，X_AG為對應測量的平均灰度；

Y_AOD＝-178.868X_AOD+84.222，其中，Y_AOD為推斷的死后間隔時間，X_AOD對應測量的平均光密度；

Y_IOD＝-6.422X_IOD+91.398，其中，Y_IOD為推斷的死后間隔時間，X_IOD為對應測量的積分光密度；

根據所述線性回歸方程中的一個或多個確定死后間隔時間。

具體地，所述樣本剪取自所述人死后5～36h的所述膽囊粘膜上皮細胞。

進一步地，所述涂片的方法為：將取出的所述樣本置于含有400mg/L的慶大霉素的生理鹽水中，首次剪取所述樣本的時間在所述人死后5h完成，在18℃恒溫箱中存放0.5h，然后在保濕盒內，剪取0.5cm×0.5cm×1cm所述樣本1份，且每隔1h剪取一次，將剪取的所述樣本浸于清水中洗滌，取出所述樣本并用濾紙吸干，將吸干后的所述樣本涂布。

進一步地，將涂布后的所述樣本采用孚爾根染色方法進行染色。

具體地，所述孚爾根染色方法包括：將備染的所述涂片浸入固定液中固定0.5h，取出后置于6N鹽酸溶液中水解30min，取出后置于蒸餾水中洗滌，再浸入由副品紅配制的席夫氏試劑中放置30min，用濃度為0.5％的偏重亞硫酸鈉溶液浸洗2min，重復浸洗三次，流水沖洗5min后，進行封片。

進一步地，所述固定液為卡諾氏固定液。

具體地，所述圖像分析采用彩色病理圖像分析系統。

進一步地，在顯微鏡高倍物鏡下攝取染色后的所述涂片的圖像視野，以“弓”字型的形狀作為采集線路，保證采集的圖像無重復、無交叉，且每張所述涂片隨機取10個視野，每個視野采集一幅圖像。

進一步地，所述幾何參數包括面積、平均直徑、等效直徑和周長。