[發明專利]纖維素酶法提取白花蛇舌草多糖的工藝方法

有效

• 申請號: 201410269480.1
• 申請日: 2014-06-17
• 公開（公告）號: CN104059159A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 賀建華;符晨星;瞿俊勇;游思湘;劉湘新
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 江巨鰲

1.一種纖維素酶法提取白花蛇舌草多糖的工藝方法，其特征在于：按照白花蛇舌草與水重量比1：8～12的料液比配制提取液，在提取液中添加纖維素酶熱水浸提，80％醇沉，脫蛋白，脫色素，最后精制而成；

具體按如下步驟進行：

(1)熱水浸提：將白花蛇舌草進行粉碎，過40目篩，按1：8～12重量比的料液比加入水配制成白花蛇舌草提取液；用磷酸緩沖液調節pH為7，加入1.5～2.5％的纖維素酶，混勻，55℃水浴攪拌加熱提取60分鐘，抽濾得濾液；將濾渣按1：8～12重量比的料液比加入水，用磷酸緩沖液調節pH為7，再加入1.5～2.5％的纖維素酶，混勻，55℃水浴攪拌加熱提取60分鐘再提取一次，抽濾得濾液，合并兩次濾液，對濾液進行90℃滅活酶10分鐘；

(2)濃縮：將濾液真空旋轉減壓濃縮至濃度為含生藥0.5～1克/毫升，放至室溫；

(3)第一次醇沉：在濃縮液中加入95％乙醇至醇濃度為80％，邊加邊攪拌，密封蓋嚴，靜置24～48小時；抽濾，得白花蛇舌草粗多糖；

(4)脫蛋白：將白花蛇舌草粗多糖加適量水溶解，加等體積5％的三氯乙酸，邊加邊攪拌，靜置60分鐘，3000rmp離心5分鐘，取上清液，再重復以上操作進行第二次脫蛋白，得脫蛋白多糖溶液；

(5)第二次醇沉：在脫蛋白后的白花蛇舌草多糖液中加入95％乙醇至醇濃度為80％，邊加邊攪拌，密封蓋嚴，靜置24～48小時；抽濾，用無水乙醇洗滌2-3次，真空干燥，得白花蛇舌草多糖；

(6)脫色素：將白花蛇舌草多糖用適量水溶解，加入重量1％的活性炭，混勻，加熱至80℃溫度攪拌30分鐘，過濾，收取濾液；將濾液加入重量1％的活性炭，混勻，加熱至80℃溫度攪拌30分鐘，過濾，得脫色素白花蛇舌草多糖溶液；

(7)第三次醇沉：將脫色素白花蛇舌草多糖液加入95％乙醇至醇濃度為80％，邊加邊攪拌，密封蓋嚴，靜置24小時；抽濾，用無水乙醇洗滌2-3次，真空干燥，得精制白花蛇舌草多糖。

2.根據權利要求1所述的纖維素酶法提取白花蛇舌草多糖的工藝方法，其特征在于：(1)取白花蛇舌草進行粉碎，過40目篩，稱取白花蛇舌草粉末20克，加水至200毫升，混合均勻；用磷酸緩沖液調節pH為7左右，在料液中添加2％的纖維素酶，混勻，55℃水浴攪拌浸提60分鐘；對濾渣進行第二次熱水浸提，加水至200毫升，混合均勻，用磷酸緩沖液調節pH為7左右，添加2％的纖維素酶，混勻，55℃水浴攪拌浸提60分鐘，抽濾得濾液，合并二次濾液進行90℃滅活酶10分鐘；

(2)濃縮：將濾液真空旋轉減壓濃縮至30～40毫升，放至室溫；

(3)第一次醇沉：以上制備的濃縮液中加入95％乙醇至醇濃度為80％，邊加邊攪拌，密封蓋嚴，靜置24小時；抽濾，真空干燥，得白花蛇舌草粗多糖；

(4)第一次脫蛋白：將以上所制得的白花蛇舌草粗多糖加20～30毫升超純水溶解，加等體積5％的三氯乙酸，邊加邊攪拌，靜置60分鐘，3000rmp離心5分鐘，取上清液；

(5)第二次脫蛋白：將上清液再加等體積5％的三氯乙酸，邊加邊攪拌，靜置60分鐘，3000rmp離心5分鐘，取上清液，得脫蛋白多糖溶液；

(6)第二次醇沉：以上脫蛋白多糖溶液中加入95％乙醇至醇濃度為80％，邊加邊攪拌，密封蓋嚴，靜置24小時；進行抽濾，用無水乙醇洗滌2～3次，脫蛋白多糖與無水乙醇w:v為1:3～5kg/L，真空干燥，得脫蛋白多糖；

(7)第一次脫色素：將以上制得的脫蛋白多糖加20～30毫升超純水溶解，按照1％重量加入活性炭，攪勻，加熱至80℃攪拌30分鐘，過濾，取濾液；

(8)第二次脫色素：將以上所得濾液再按照1％濃度加入活性炭攪勻，加熱至80℃攪拌30分鐘，過濾，取濾液；

(9)第三次醇沉：將以上制得的脫色素多糖液加入95％乙醇至醇濃度為80％，邊加邊攪拌，密封蓋嚴，靜置24小時；抽濾，無水乙醇洗滌2-3次，真空干燥，得白花蛇舌草精制多糖1.76～1.79克。