[發明專利]一種人胞質凝溶膠蛋白的表達純化方法在審
| 申請號： | 201410268959.3 | 申請日： | 2014-06-17 |
| 公開（公告）號： | CN104004780A | 公開（公告）日： | 2014-08-27 |
| 發明（設計）人： | 吉麗娜;華子春;趙熙 | 申請（專利權）人： | 南京大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C07K14/47;C07K1/22 |
| 代理公司： | 江蘇致邦律師事務所 32230 | 代理人： | 徐蓓 |
| 地址： | 210093 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 人胞質凝 溶膠 蛋白 表達 純化 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種人胞質凝溶膠蛋白的表達純化方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：
（1）構建含有人胞質凝溶膠蛋白基因（hcGSN）的重組表達載體pET-15b-hcGSN；
（2）將重組表達載體pET-15b-hcGSN轉化于大腸桿菌BL21(DE3)，得到含有重組質粒的工程菌株；
（3）將工程菌接種于LB液體培養基中培養，加入終濃度為0.4mM的IPTG，于37℃誘導表達4小時；
（4）5000rpm離心收集菌體并于冰浴中超聲波裂解，然后15000rpm離心獲取上清；
（5）將上清上樣于鎳離子親和層析柱Ni?Sepharose?6?Fast?Flow，純化得到N端帶有His標簽的重組蛋白hcGSN。
2.根據權利要求1所述的人胞質凝溶膠蛋白的表達純化方法，其特征在于：所述的His標簽與hcGSN的氨基酸序列之間還設計有凝血酶的切割位點，即Leu-Val-Pro-Arg-Gly-Ser。
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