[發明專利]黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記及其專用引物和應用

有效

• 申請號: 201410268550.1
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104946630B
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 溫常龍;董從娟;毛愛軍;于拴倉;許勇
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 11387 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 劉春成;榮紅穎

本發明公開了一種黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記及其專用引物和應用。該分子標記是用以下引物自黃瓜總DNA中擴增出來的核苷酸序列之一：序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。上述分子標記可鑒定目的基因黃瓜靶斑病抗病基因Cca的存在，實現對抗病植株的間接選擇，由于不受其他基因效應和環境因素的影響，可用于早代選擇，縮短育種年限，提高育種效率，為進行黃瓜靶斑病抗病育種提供技術支持。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域的分子標記，特別涉及與黃瓜靶斑病抗病基因Cca連鎖的分子標記及其在黃瓜種質資源選擇中的應用。

背景技術

黃瓜(Cucumis Sativus.L)在世界上廣泛栽培，中國是世界上黃瓜栽培面積最大、總產量最高的國家。

黃瓜棒孢葉斑病，又稱靶斑病，是一種世界性分布的病害。目前已成為危害黃瓜露地和保護地栽培的重要病害之一，尤以越冬溫室、冬春溫室、春大棚等保護地內發生嚴重。主要危害葉部，病斑初呈淡褐色后變褐綠色，嚴重時葉片枯死。該病導致落葉率低于5％時，病情擴展慢，約2周，而后一周內發展快，落葉率可由5％發展至90％。棚室內反季節種植黃瓜在冬春季節和初夏均易流行發病。田間發病率一般在10％-25％，嚴重時為60％-70％，造成損失達30％以上。靶斑病采用化學防治效果不理想，不僅使生產投入增加且會造成環境安全隱患，倒茬嫁接使技術困難和勞動成本增加。因此選育抗病品種是解決靶斑病危害的最佳途徑。

黃瓜靶斑病抗病基因影響黃瓜對靶斑病的抗性，它的研究將會推動抗病育種進程。用與目的性狀緊密連鎖的分子標記進行標記輔助選擇在黃瓜遺傳育種中十分有效。分子標記是在DNA水平上對目標性狀進行選擇，具有高效、快速、不受環境條件限制等優點，可在苗期進行選擇，加快育種進程。因此，開發用于輔助鑒定黃瓜靶斑病抗病基因Cca的分子標記十分重要。

發明內容

針對現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記及其專用引物和應用。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記，是用以下引物自黃瓜總DNA中擴增出來的核苷酸序列之一：序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

獲得上述黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記的引物如下：1)獲得黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記CcaSNP1的引物為序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；2)獲得黃瓜靶斑病抗病連鎖分子標記CcaSNP2的引物為序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

利用上述引物對，通過常規PCR法可得到上述分子標記。

本發明涉及的與黃瓜抗靶斑病共分離的dCAPs標記CcaSNP1，是利用抗/感遺傳群體(母本：WF2757，抗靶斑??；父本：新泰密刺，感靶斑病)進行精細定位和克隆獲得的。通過利用150株的F_2:3群體對靶斑病抗病基因Cca進行初步定位，然后利用2000株的F₂群體對Cca基因進行精細定位到80kb的區間內。該區間內含3個基因，分別是NB-ARC抗病基因、BIM2-like轉錄因子相關基因和33-like肽重復序列結構蛋白相關基因，其中NB-ARC基因經過驗證分析，被證實為靶斑病抗病基因Cca的重要候選基因。通過對比研究Cca基因在抗/感黃瓜材料中的序列差異，發現一個SNP位點，依據http://helix.wustl.edu/dcaps/dcaps.html，在線設計軟件，開發設計了與抗/感靶斑病緊密連鎖的dCAPs分子標記CcaSNP1。同時利用CcaSNP1標記分析2000多株遺傳群體材料，結合田間靶斑病接種鑒定研究，發現CcaSNP1標記與抗感靶斑病緊密連鎖，達到共分離。