[發明專利]一種從地骨皮中提取地骨皮總黃酮的方法

在審

• 申請號: 201410266223.2
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104083525A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61K36/815
• 分類號: A61K36/815;A61K125/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種從地骨皮中提取地骨皮總黃酮的方法，尤其涉及一種利用生物酶協同超聲波提取地骨皮總黃酮的方法。

背景技術

地骨皮為茄科植物枸杞或寧夏枸杞的干燥根皮。味甘、寒，歸肺、肝、腎經，具有涼血除蒸，清肺降火之功效，用于陰虛潮熱、骨蒸盜汗、肺熱咳嗽、咯血及內熱消渴等癥?，F代藥理研究表明地骨皮主要具有清除自由基、抗氧化等活性，這些作用和其中的黃酮類有效成分有關，因此，地骨皮中黃酮的提取具有重要的意義。

目前，關于地骨皮總黃酮的提取的專利和文獻較少，主要采用回流提取，該方法的缺點在于提取的總黃酮雜質多，收率低，溶劑消耗量大。

酶工程技術是近年來一種新興的技術，利用纖維素酶、果膠酶、蛋白酶等（主要是纖維素酶）破壞植物的細胞壁，以有利于有效成分最大限度溶出的一種方法因其處理條件溫和，有效成分損失較小。再結合超聲波的空化效應以及機械效應，從而使細胞中的有效成分得以釋放直接與溶劑接觸并溶解在其中，從而提高有效成分的提取率。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種提取地骨皮總黃酮的方法，該方法具有工藝簡單、易操作、提取時間短、提取率高、對環境友好等優點。

本發明包括以下步驟：

a.地骨皮于60℃烘干、粉碎，過80目篩；

b.向上述原料中加入4~9倍的酸性乙醇溶液，再加入原料1~2%（重量比）的生物酶，攪拌均勻；

c.置于頻率為20~40kHz的超聲波提取器中，控溫在45~60℃，提取90~120min，80℃滅活10min，離心，取上清液；

d.將步驟c中的上清液加入適量的堿調pH值為中性，濃縮至無醇味，轉入徑高比為1:4~8、粒徑為80~100目的聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫除去雜質，后用4~8BV的60~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥至恒重，即得地骨皮總黃酮。

本發明步驟b中所述的酸性乙醇為pH4.0~5.0的60~70%的乙醇溶液。

本發明步驟b中所述的生物酶為重量比0.7:0.3的纖維素酶和蛋白酶的混合物。

本發明步驟d中所述的堿為碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉中的一種。

本發明與現有技術相比，具有以下優點：

（1）總黃酮含量和收率較高：本發明采用生物酶酶解，破壞細胞壁的致密結構，在結合超聲波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了總黃酮的提取率；

（2）本發明采用聚酰胺樹脂進行分離純化，該樹脂重復利用率高，價格便宜，使用與工業生產。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式：

實施例1：

地骨皮于60℃烘干、粉碎，過80目篩，取100g粉末，加入9倍的pH4.0的70%的乙醇溶液，再加入原料1%（重量比）的纖維素酶和蛋白酶（重量比為0.7:0.3）的混合物，攪拌均勻，置于頻率為20kHz的超聲波提取器中，控溫在60℃，提取90min，80℃滅活10min，離心，取上清液，加入適量的氫氧化鈉調pH值為中性，濃縮至無醇味，轉入徑高比為1:?8、粒徑為100目的聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫除去雜質，后用4BV的80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥至恒重，即得地骨皮總黃酮提取物12.8g，經UV檢測，總黃酮的含量為71.8%。

實施例2：

地骨皮于60℃烘干、粉碎，過80目篩，取100g粉末，加入6倍的pH4.5的65%的乙醇溶液，再加入原料1.5%（重量比）的纖維素酶和蛋白酶（重量比為0.7:0.3）的混合物，攪拌均勻，置于頻率為40kHz的超聲波提取器中，控溫在50℃，提取120min，80℃滅活10min，離心，取上清液，加入適量的碳酸鈉調pH值為中性，濃縮至無醇味，轉入徑高比為1:?6、粒徑為80目的聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫除去雜質，后用6BV的70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥至恒重，即得地骨皮總黃酮提取物14.2g，經UV檢測，總黃酮的含量為75.1%。

實施例3：

地骨皮于60℃烘干、粉碎，過80目篩，取100g粉末，加入4倍的pH5.0的60%的乙醇溶液，再加入原料2%（重量比）的纖維素酶和蛋白酶（重量比為0.7:0.3）的混合物，攪拌均勻，置于頻率為20kHz的超聲波提取器中，控溫在45℃，提取110min，80℃滅活10min，離心，取上清液，加入適量的氫氧化鉀調pH值為中性，濃縮至無醇味，轉入徑高比為1:?4、粒徑為100目的聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫除去雜質，后用8BV的60%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥至恒重，即得地骨皮總黃酮提取物11.5g，經UV檢測，總黃酮的含量為69.4%。