[發明專利]一種蠶沙藥材的檢測方法

有效

• 申請號: 201410264691.6
• 申請日: 2014-06-13
• 公開（公告）號: CN104007206A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 潘杰;于娟;吳麗璇;陳啟蘭
• 申請（專利權）人: 漳州片仔癀藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/78;G01N30/90
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

1.一種蠶沙藥材的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括如下對1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟：

精密稱定1-脫氧野尻霉素對照品5-15mg，加水稀釋制成每mL含0.1-0.5mg的對照品儲備液；精密量取1mL所述對照品儲備液，并精密加入質量濃度為1-3％的NaHCO₃溶液1-4mL以及1-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液1-4mL，混勻并于30-60℃進行水浴反應20-40min，隨后以30-60％的乙腈定容至20-30mL，作為對照品溶液；

取待測蠶沙藥材研細，并精密稱取0.5-2.0g，加入用濃鹽酸調pH值為3-4的水30-60mL，攪拌均勻，超聲處理20-30min，并離心取上清液；殘渣加pH值為3-4的水適量洗滌，離心合并上清液，并濃縮至10-20mL；將濃縮液置于陽離子交換樹脂柱，先用水洗脫，收集并棄去水洗脫液，再用0.5M氨水洗脫，并收集氨水洗脫液，濃縮至近干，隨后加水10mL溶解，超聲處理1-5分鐘，并加水定容至20-30mL，得到供試品儲備液；精密量取1mL所述供試品儲備液，依次加入質量濃度為1-3％的NaHCO₃溶液1mL、以及1-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于30℃進行水浴反應40min，隨后以30-60％的乙腈定容至20-30mL，作為供試品溶液；

照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛為流動相A、以0.2％的磷酸溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0-8min，A：B為25％：75％；8-40min，A：B為25％：75％→50％：50％；40-45min，A：B為50％：50％；45-46min，A：B為50％：50％→25％：75％；46-75min，A：B為25％：75％；控制流速1.0mL/min，柱溫25℃，檢測波長263nm，理論板數按1-脫氧野尻霉素峰計算應不低于6000；

精密吸取所述對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定。

2.根據權利要求1所述的蠶沙藥材的檢測方法，其特征在于，所述對1-脫氧野尻霉素的含量進行測定的步驟包括：

精密稱定1-脫氧野尻霉素對照品10mg，加水稀釋制成每mL含0.2mg的對照品儲備液；精密量取1mL所述對照品儲備液，并精密加入質量濃度為2％的NaHCO₃溶液1mL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于30℃進行水浴反應40min，隨后以50％的乙腈定容至25mL，作為對照品溶液；

取待測藥材研細，并精密稱取1g，加入用濃鹽酸調pH值為3-4的水50mL，攪拌均勻，超聲處理30min，并離心取上清液；殘渣加pH值為3-4的水適量洗滌，離心合并上清液，并濃縮至20mL；將濃縮液置于陽離子交換樹脂柱，先用水洗脫，收集并棄去水洗脫液，再用0.5M氨水洗脫，并收集氨水洗脫液，濃縮至近干，隨后加水10mL溶解，超聲處理2分鐘，并加水定容至25mL，得到供試品儲備液；精密量取1mL所述供試品儲備液，依次加入質量濃度為2％的NaHCO₃溶液1mL、以及1mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于30℃進行水浴反應40min，隨后以50％的乙腈定容至25mL，作為供試品溶液；

照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛為流動相A、以0.2％的磷酸溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0-8min，A：B為25％：75％；8-40min，A：B為25％：75％→50％：50％；40-45min，A：B為50％：50％；45-46min，A：B為50％：50％→25％：75％；46-75min，A：B為25％：75％；控制流速1.0mL/min，柱溫25℃，檢測波長263nm，理論板數按1-脫氧野尻霉素峰計算應不低于6000；

精密吸取所述對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定。

3.根據權利要求1或2所述的蠶沙藥材的檢測方法，其特征在于，所述1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟中，所述陽離子交換樹脂柱為D001-CC型陽離子交換樹脂柱，樹脂體積為50mL，徑高比為1：8。