[發明專利]以含氫硅油疏水改性的二氧化硅為載體的固定化脂肪酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201410263491.9
• 申請日: 2014-06-14
• 公開（公告）號: CN104087571B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 徐巖;江波;韓曉曉;喻曉蔚;宋聰
• 申請（專利權）人: 江南大學;四川大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙)51220
• 代理人: 譚新民

1.一種固定化脂肪酶，其特征在于，包括以含氫硅油改性的SiO₂為載體，以及固定在所述SiO₂上的脂肪酶，含氫硅油改性的SiO₂與脂肪酶的質量比為2：1-8：1，所述含氫硅油改性的SiO₂由以下步驟制備得到：

將SiO₂加入到包括含氫硅油和惰性溶劑的混合溶液中，所述混合溶液的濃度為0.1-10wt％，攪拌均勻后，加入與SiO₂質量比為0-1000ppm的Karstedt催化劑，0-100℃攪拌反應1-6h；離心，去除惰性溶劑，得到含氫硅油改性的SiO₂，所述含氫硅油與SiO₂的質量比為0.025-2.5；所述含氫硅油為含Si-H鍵的液態聚硅氧烷，其結構如下：

其中，-R為C₁-C₂₂烷基、芳烷基、環烷基、或以上基團中任意兩種或兩種以上的組合；-R’為C₁-C₂₂烷基，芳烷基，環烷基，氫基，或以上基團中任意兩種或兩種以上的組合；m為0-420，n為0-350。

2.根據權利要求1所述的固定化脂肪酶，其特征在于，所述-R選自：-CH₃、-C₂H₅、-C₈H₁₇、-C₆H₅、-C₆H₁₀、-C₁₂H₂₅、-C₁₆H₃₃、-C₁₈H₃₇，或以上基團中任意兩種或兩種以上的組合；

-R’選自：-H、-CH₃、-C₂H₅、-C₈H₁₇、-C₆H₅、-C₆H₁₀、-C₁₂H₂₅、-C₁₆H₃₃、-C₁₈H₃₇，或以上基團中任意兩種或兩種以上的組合。

3.根據權利要求1所述的固定化脂肪酶，其特征在于，所用含氫硅油的含氫量為0.01-1.60wt％。

4.根據權利要求1所述的固定化脂肪酶，其特征在于，所述脂肪酶包括：米根霉脂肪酶、華根霉脂肪酶、德氏根霉脂肪酶、雪白根霉脂肪酶、豬胰脂肪酶、洋蔥假單胞菌脂肪酶、南極假絲酵母脂肪酶、米曲霉脂肪酶。

5.一種如權利要求1所述固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

將脂肪酶溶于0.02-1.50mol/L pH＝6.0-9.0的磷酸緩沖液中，配制濃度為5-15mg/ml的脂肪酶溶液；

將SiO₂粒子加入到包括有含氫硅油和惰性溶劑的混合溶液中，所述混合溶液的濃度為0.1-10wt％，攪拌均勻后，加入與SiO₂質量比為0-1000ppm的Karstedt催化劑，0-100℃攪拌反應1-6h；離心，去除惰性溶劑，得到含氫硅油改性的SiO₂；將改性后的SiO₂浸泡在脂肪酶溶液中，SiO₂與脂肪酶的質量比為2：1，0-40℃振蕩反應0.5-12h，離心分離，磷酸緩沖液洗滌，室溫干燥，得到固載在疏水改性的SiO₂上的固定化脂肪酶。

6.根據權利要求5所述的固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，所述含氫硅油與SiO₂的質量比為0.025-2.5。