[發明專利]鑒定或輔助鑒定狐貍組織和/或器官的PCR引物對及其應用

有效

• 申請號: 201410261937.4
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN104032011A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 于雷;姜艷彬;王海;李穎;蔡英華;劉洪斌;劉勇軍;王瑩;田亞平
• 申請（專利權）人: 于雷
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及生物技術領域中鑒定或輔助鑒定狐貍組織和/或器官的PCR引物對及其應用。

背景技術

目前在國內生肉和肉制品的生產和銷售領域，一些不法商販為了牟取暴利，利用摻雜摻假等手段欺騙消費者的事件時有發生，比如用狐貍、貉子和水貂的肉冒充狗肉、牛肉和羊肉等。因此一套快速、準確鑒別肉種類，并且能夠適應混合肉制品鑒定的方法，無疑會為執法人員提供了強大的技術支撐。

傳統的肉制品鑒定的方法主要是基于蛋白質水平的分析，包括電泳法、免疫法、ELISA等技術。操作過程中首先需制備相應物種的抗體，然后抗原和抗體間進行免疫反應，最后通過電泳或者顯色等方法進行鑒別。這類鑒別技術受蛋白質(主要起作用的部分為抗原決定簇)結構的影響很大，實際應用中經常出現的問題包括：1.熱加工過程會改變蛋白質(抗原決定簇)的結構，因而無法檢測熱加工的肉類；2.對混合肉類的檢測可能出現交叉反應，因為不同物種蛋白質的結構可能具有某種程度的相似性，檢驗的靈敏程度取決于制備的抗體的特異性強弱。

基于以上原因，以核酸為基礎的檢測方法成為近幾年食品檢測領域的發展方向，包括DNA分子雜交法和PCR方法等。DNA分子雜交法操作復雜，且成本較高，目前以逐漸被PCR方法所取代。PCR方法靈敏度高、特異性強，可對混合肉類進行鑒別和區分，即使摻雜少量異種肉，也能用PCR方法加以鑒別；PCR方法可用于熱加工的肉制品鑒別當中，高溫過程僅僅打斷了核酸的片斷，并不會完全降解核酸，因而熱加工的肉制品當中仍然存在可擴增的模板，這在飼料工業肉骨粉來源的鑒別過程中得到了很好的證實；PCR反應迅速，結果易于觀測，使得這種檢測方法目前廣泛應用在飼料、保健品的動物源性成分的鑒別當中。

PCR技術中，引物設計是PCR成功的關鍵因素，好的引物將是檢測實驗更加快捷，結果更加清晰。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種鑒定或輔助鑒定動物組織和/或器官的PCR引物對組合物。

本發明所提供的鑒定或輔助鑒定動物組織和/或器官的PCR引物對組合物，為組合物1、組合物2或組合物3；

所述組合物1由獨立包裝的三個引物對組成，即由名稱為clf的鑒定或輔助鑒定家犬組織和/或器官的PCR引物對、名稱為vvf的鑒定或輔助鑒定狐貍組織和/或器官的PCR引物對和名稱為np的鑒定或輔助鑒定貉子組織和/或器官的PCR引物對組成；所述clf由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成；所述動物為家犬、狐貍和貉子這三種動物中的三種、兩種或一種；

所述組合物2由獨立包裝的兩個引物對組成，即由名稱為clf的鑒定或輔助鑒定家犬組織和/或器官的PCR引物對和名稱為vvf的鑒定或輔助鑒定狐貍組織和/或器官的PCR引物對組成；所述clf由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成；所述動物為家犬和/或狐貍；

所述組合物3由獨立包裝的兩個引物對組成，即由名稱為vvf的鑒定或輔助鑒定狐貍組織和/或器官的PCR引物對和名稱為np的鑒定或輔助鑒定貉子組織和/或器官的PCR引物對組成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成；所述動物為狐貍和/或貉子。

上述鑒定或輔助鑒定動物組織和/或器官的PCR引物對組合物中，所述clf、所述vvf和所述np可均獨立包裝。

其中，PCR引物對clf可從家犬的基因組中PCR擴增獲得序列表中序列9所示的DNA片段，序列表中序列9共有688個核苷酸，其中前25位和后25位分別為序列表中序列1和序列2所示上下游引物。PCR引物對vvf可從狐貍的基因組中PCR擴增獲得序列表中序列10所示的DNA片段，序列表中序列10共有375個核苷酸，其中前23位和后23位分別為序列表中序列3和序列4所示上下游引物。PCR引物對np可從貉子的基因組中PCR擴增獲得序列表中序列11所示的DNA片段，序列表中序列11共有456個核苷酸，其中前23位和后20位分別為序列表中序列5和序列6所示上下游引物。