[發明專利]一種用于在米曲霉細胞分泌表達外源蛋白的表達設備及其米曲霉基因工程菌

有效

• 申請號: 201410260946.1
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN104004760B
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 魏東芝;高蓓;毛佑志
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/80;C12N1/15;C12P21/00;C12R1/69
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司31002
• 代理人: 鄧琪

1.一種表達外源蛋白的米曲霉基因工程菌，其特征在于，所述米曲霉基因工程菌包括宿主菌和表達載體，所述宿主菌是米曲霉尿嘧啶營養缺陷型菌株RIB40-PF1，該菌株RIB40-PF1的保藏號為CGMCC NO：9129，所述表達載體從5’至3’依次包括以下元件：(1)控制外源基因在米曲霉中轉錄的米曲霉α-淀粉酶啟動子，序列如SEQ ID NO:1所示序列的第7位至第623位；(2)控制外源蛋白在米曲霉中分泌表達的信號肽的序列，如SEQ ID NO:1所示序列的第624位至第695位；(3)用于外源蛋白親和純化的His-Tag標簽的序列，如SEQ ID NO:1所示序列的第696位至第713位；(4)多克隆位點，序列如SEQ ID NO:1所示序列的第714位至第784位；(5)控制外源基因在米曲霉中終止轉錄的米曲霉α-淀粉酶終止子，序列如SEQ ID NO:1所示序列的第785位至第1681位；(6)用于質粒轉化篩選標記的米曲霉乳清酸磷酸核糖轉移酶基因的表達盒，所述用于質粒轉化篩選標記的米曲霉乳清酸磷酸核糖轉移酶基因的表達盒的序列如SEQ ID:2所示。

2.根據權利要求1所述的米曲霉基因工程菌，其特征在于，所述表達載體進一步包括外源蛋白的編碼序列，所述外源蛋白的編碼序列位于多克隆位點之中。

3.一種根據權利要求1-2中任意一項所述的表達外源蛋白的米曲霉基因工程菌的制備方法，其特征在于，包括：將已包括外源蛋白的編碼序列的所述表達載體轉化米曲霉尿嘧啶營養缺陷型菌株RIB40-PF1，挑選陽性克隆，制得所述表達外源蛋白的米曲霉基因工程菌。

4.一種根據權利要求1-2中任意一項所述的表達外源蛋白的米曲霉基因工程菌在制備工業酶制劑、飼料添加劑或蛋白質藥物中的應用。