[發(fā)明專利]一種結(jié)核桿菌的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410260553.0
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN104034889A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江崇才;李作臻;仇彩霞
• 申請（專利權(quán)）人: 江崇才
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種結(jié)核桿菌的檢測方法。

背景技術(shù)

結(jié)核桿菌，是引起結(jié)核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺結(jié)核為最多見。結(jié)核病至今仍為重要的傳染病。估計世界人口中1/3感染結(jié)核分枝桿菌。據(jù)WHO報道，每年約有800萬新病例發(fā)生，至少有300萬人死于該病。我國建國前死亡率達(dá)200-300人/10萬，居各種疾病死亡原因之首，建國后人民生活水平提高，衛(wèi)生狀態(tài)改善，特別是開展了群防群治，兒童普遍接種卡介苗，結(jié)核病的發(fā)病率和死亡率大為降低。但應(yīng)注意，世界上有些地區(qū)因艾滋病、吸毒、免疫抑制劑的應(yīng)用、酗酒和貧困等原因，發(fā)病率又有上升趨勢。結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略帶彎曲的桿菌，大小1～4X0.4μm。分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60％，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼抗酸染色法，以5％石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上，但用3％鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍(lán)復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色，而其他細(xì)菌和背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。結(jié)核桿菌的檢測與預(yù)防是降低結(jié)核病的發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵。目前檢測結(jié)核桿菌的方法主要有結(jié)核菌素實驗、結(jié)核菌γ干擾素釋放試驗、微生物學(xué)檢查法和快速檢測法等。其中結(jié)核菌素實驗適合實驗室研究，不適合疾病的診斷；結(jié)核菌γ干擾素釋放試驗所需技術(shù)高，成本高；微生物學(xué)檢查法步驟繁瑣；快速檢測法準(zhǔn)確性不高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有準(zhǔn)確性高，成本低，步驟簡單，檢測時間短的結(jié)核桿菌的檢測方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：包括如下步驟：

1)用直接涂片的方式采集樣本，挑出能檢測出抗酸桿菌的涂片，標(biāo)記此種樣本，待測；

2)用待測樣本感染噬菌體，并殺死結(jié)核桿菌外未感染噬菌體，既得已感染結(jié)核桿菌的噬菌體，備用；

3)將步驟2)中所得噬菌體用生物擴(kuò)增法擴(kuò)增已感染的噬菌體，備用；

4)將步驟3)中所得噬菌體用抗噬菌體的抗體標(biāo)金，采用快速免疫層析法檢測噬菌體的存在與否從而判斷樣品中是否有結(jié)核桿菌。

本發(fā)明的一種結(jié)核桿菌的檢測方法及其制備方法的有益效果是：準(zhǔn)確性高，成本低，步驟簡單，檢測時間短。

具體實施方式

為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的特征、技術(shù)手段及所達(dá)到的具體功能，下面以具體實施方式對本發(fā)明做詳細(xì)描述。

實施例：

一種結(jié)核桿菌的檢測方法，

所述結(jié)核桿菌的檢測方法的制備方法過程如下：

1)用直接涂片的方式采集樣本，挑出能檢測出抗酸桿菌的涂片，標(biāo)記此種樣本，待測；

2)用待測樣本感染噬菌體，并殺死結(jié)核桿菌外未感染噬菌體，既得已感染結(jié)核桿菌的噬菌體，備用；

3)將步驟2)中所得噬菌體用生物擴(kuò)增法擴(kuò)增已感染的噬菌體，備用；

4)將步驟3)中所得噬菌體用抗噬菌體的抗體標(biāo)金，采用快速免疫層析法檢測噬菌體的存在與否從而判斷樣品中是否有結(jié)核桿菌。

實驗例：

實驗對象：200名感染結(jié)核桿菌程度不同的患者。

實驗方法：200名患者全部用本發(fā)明的結(jié)核桿菌的檢測方法檢測。

實驗結(jié)果：通過本發(fā)明的結(jié)核桿菌的檢測方法檢測，所有患者都成功地檢測出來丙型結(jié)核桿菌。

由實驗結(jié)果可知，使用本結(jié)核桿菌的檢測方法準(zhǔn)確性高，成本低，步驟簡單，檢測時間短。

以上已將本發(fā)明做一詳細(xì)說明，以上所述，僅為本發(fā)明之較佳實施例而已，當(dāng)不能限定本發(fā)明實施范圍，即凡依本申請范圍所作均等變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋范圍內(nèi)。