[發明專利]布魯氏菌omp31蛋白的單克隆抗體及其應用在審

申請號：	201410258973.5	申請日：	2014-06-11
公開（公告）號：	CN104086628A	公開（公告）日：	2014-10-08
發明（設計）人：	王文敬;廖卿宇;李婷婷;黎誠耀	申請（專利權）人：	南方醫科大學
主分類號：	C07K7/08	分類號：	C07K7/08;C07K16/12;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/40;A61K39/10;A61P31/04;C12R1/91
代理公司：	廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205	代理人：	鄭瑩
地址：	510515 廣東***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	布魯氏菌 omp31 蛋白單克隆抗體及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種布魯氏菌omp31蛋白表位，以及使用該表位刺激得到的抗布魯氏菌omp31蛋白單克隆抗體。本發明還涉及表位抗體及該表位的應用。

背景技術

布魯氏菌病（Brucellosis）是目前世界上流行最廣的人畜共患傳染病之一，據世界衛生組織統計表明，全世界每年出現50萬例人布魯氏菌病，每年造成的經濟損失達30億美元?。我國布病的流行以羊種布氏桿菌為主的混合感染，羊種占流行株的80%。

布魯氏菌病臨床癥狀復雜，引起的發熱、流產等病理損害易與某些常見疾病混淆；醫生很難單憑有無病畜接觸史來診斷布氏菌感染，給診斷帶來了一定的困難，容易導致誤診，造成慢性感染。另一方面缺乏有效的治療手段，抗生素的大量長期使用仍很難見效，且容易引起耐藥性問題。因此，布魯氏菌的疫苗預防和早期快速診斷對布菌的防控具有重大的現實意義；其中疫苗的免疫效果和布菌診斷的準確性就顯得尤為重要。目前，布魯氏菌病的免疫制劑種類主要包括弱毒活疫苗﹑死疫苗﹑亞單位疫苗﹑抗獨特性疫苗和DNA疫苗等。

由于熱滅活菌缺乏活性抗原刺激，不能在體內誘發可檢測的IL-12，并且抑制IL-12的產生，免疫效果不佳，而且死菌誘發的多是無保護力的體液免疫應答。而亞單位疫苗雖然可起到短期的保護作用，但并不能誘發有效的長期免疫，只有活菌才能誘發細胞免疫。

我國主要是以布魯氏菌弱毒菌苗株M5-90來免疫羊。它對成年羊有很好的免疫保護效果，但會導致妊娠羊流產。omp31蛋白為膜孔蛋白，與弱毒菌苗株毒力相關，并含有保護性抗原表位，其基因序列在不同的種屬之間的同源性高達98％以上，在牛種菌中缺失，在羊種和豬種之間存在大約9個核苷酸的差異，并存在氨基酸序列的改變，故omp31蛋白的單克隆抗體可能能夠鑒別診斷不同生物型的布魯氏菌感染。若將M5-90疫苗株攜帶的omp31基因全部敲除，則影響弱毒菌苗株的免疫效果。另外，由于M5-90免疫的動物和野毒菌株自然感染的動物現有診斷方法不能鑒別，嚴重影響了布魯氏菌病的檢驗和疫苗免疫預防。因此，針對omp31蛋白的抗原表位進行修飾或改造標記疫苗，可建立該表位多肽ELISA診斷方法及其診斷試劑，進而解決布魯氏菌病鑒別診斷和基因工程標記弱毒菌苗株的技術難題。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種布魯氏菌omp31蛋白表位。

本發明的另一個目的在于提供由上述表位刺激產生的單克隆抗體。

本發明的又一個目的在于提供上述蛋白表位或單克隆抗體在制備診斷、預防或治療布魯氏菌病的試劑或藥物中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

布魯氏菌omp31蛋白表位，其序列為GDDASALHTWSDKTKA?(?SEQ?ID?NO:20)。

一種抗布魯氏菌omp31蛋白的單克隆抗體，其制備方法為：

1）將上述的布魯氏菌omp31蛋白表位免疫動物；

2）取經免疫的動物脾細胞與瘤細胞融合，得到可穩定分泌抗布魯氏菌omp31蛋白表位多肽的雜交瘤細胞；

3）收集、純化雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體，即為抗布魯氏菌omp31蛋白表位多肽的單克隆抗體。

優選的，所述單克隆抗體的重鏈為IgG2a、輕鏈為κ鏈，該單克隆抗體能與權利要求1所述的布魯氏菌omp31蛋白表位特異性結合。

優選的，產生免疫反應的動物的血清間接ELISA效價不低于1：51200。