[發(fā)明專利]一種牛筋果酸的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410258102.3
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN104003997A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雷
• 申請（專利權(quán)）人: 南京雷明醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04;A61K31/352;A61P35/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種植物提取物的制備方法及應(yīng)用，特別涉及一種牛筋果酸的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用。

背景技術(shù)

牛筋果酸（Perforatic?acid）來源于苦木科(Simaroubaceae)?牛筋果?Harrisonia?perforata(Blanco)Merr.的根，mp246.5-248℃，分子式為C₁₆H₁₄O₆，分子量為302.28，結(jié)構(gòu)式為：

牛筋果酸具有抗腫瘤作用。抑制3H-TdR體外摻入小鼠肝癌腹水細(xì)胞，抑制率為91.19%。

目前，國內(nèi)學(xué)者對牛筋果酸的研究還處于起步階段，尚未見牛筋果酸工業(yè)化生產(chǎn)工藝的披露。

發(fā)明內(nèi)容

為滿足臨床需要，擴(kuò)大用藥品種，更好地治療癌癥，，提供一種牛筋果酸的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種牛筋果酸的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）取牛筋果的根，經(jīng)粉碎處理，置于萃取釜中，以乙醇作為夾帶劑，進(jìn)行超臨界CO₂萃取，解析，收集牛筋果的根萃取物；

（2）萃取物與聚酰胺樹脂按重量比1:1-2.5充分混勻，裝入層析柱，然后用30-90%乙醇洗脫，流速為0.8-2BV/h，收集洗脫液，濃縮，得粗品；

（3）采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的牛筋果酸，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機(jī)，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集牛筋果酸組分；

（4）將牛筋果酸組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得牛筋果酸。

所述步驟（1）中超臨界萃取溫度為45-55℃，萃取壓力為30-43MPa，解析溫度為25-42℃，解析壓力為6-10MPa，CO₂流量為15-20L/h。

所述步驟（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相為流動相，主機(jī)轉(zhuǎn)速700-1000rpm，流速為1-3ml/min。

所述制備的牛筋果酸，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑，包含中鏈脂肪酸鹽、膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。

本發(fā)明的有益效果：

（1）采用超臨界提取技術(shù)對環(huán)境無污染；

（2）通過聚酰胺樹脂對乙酰精寧類化合物的吸附和洗脫，操作簡單、分離效果好；

（3）采用高速逆流色譜制備工藝，較制備液相色譜制備工藝而言，克服了樣品吸附、損失和峰形拖尾等缺點(diǎn)，且具有制備量大、易于工業(yè)推廣等優(yōu)點(diǎn)；

（4）添加腸吸收促進(jìn)劑，有利于提高生物利用度。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

牛筋果酸的制備

取牛筋果的根，經(jīng)粉碎處理，稱取1kg，置于萃取釜中，以乙醇作為夾帶劑，通入超臨界CO₂流體，CO₂流量為18L/h，超臨界萃取溫度為48℃，萃取壓力為32MPa，解析溫度為29℃，解析壓力為7MPa，進(jìn)行超臨界CO₂萃取1h，解析，收集萃取物，與聚酰胺樹脂按重量比1:1.5充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脫，流速為0.8BV/h，收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品；采用高速逆流色譜法分離純化粗品中的牛筋果酸，以體積比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機(jī)，主機(jī)轉(zhuǎn)速1000rpm，泵入下相做流動相，流速為3ml/min，流動相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集牛筋果酸組分，進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得牛筋果酸，含量97.6%。

實(shí)施例2：

牛筋果酸的抗腫瘤應(yīng)用

1、材料

動物：昆明種小鼠，雌雄各半性，體重20±2g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)提供。

細(xì)胞株：Sarcoma?180腹水型瘤株（S180），由中國科學(xué)院上海藥物研究所提供。

2、方法