[發明專利]一種藻類微生物降解水中偶氮染料體系構建方法

在審

• 申請號: 201410257326.2
• 申請日: 2014-06-11
• 公開（公告）號: CN104109634A
• 公開（公告）日: 2014-10-22
• 發明（設計）人: 周培疆;何婷;潘可亮;何璇
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C02F3/32;C12R1/89;C02F101/38
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及藻類微生物技術領域，更具體涉及一種氧化還原介體催化從自然水體中篩選的藻類微生物(如兩棲顫藻或小球藻)高效降解偶氮染料體系的構建方法，該體系可用于水中偶氮染料的高效降解及其有效利用。?

背景技術

偶氮染料廢水色度高，降低了水體的光滲透率，極大地影響水生生物的光合作用，不利于水生生物生長。偶氮染料本身為致癌物質，極大損害人體健康和生態平衡。微生物處理法是通過生物吸附、酶促降解或二者結合方式實現偶氮染料降解的方法。雖然反應速率較慢，但具成本低、環境友好等優點。藻類微生物為光能自養型生物，與細菌、真菌微生物相比較，其生長不需要外加碳源，適用于處理染料廢水。但藻類微生物降解染料廢水速率較慢，耗時較長，難以實現大規模實際應用。因此，構建藻類微生物高效降解水中偶氮染料體系具有重要意義。?

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種從自然水體中篩選藻類微生物(如兩棲顫藻或小球藻)高效降解水中偶氮染料體系的構建方法，方法易行，操作簡便，以氧化還原介體催化從自然水體中篩選的藻類微生物高效降解水中偶氮染料體系，該體系降解率高，反應速率快，實驗參數易控制，所需原料價格低廉，可直接用于水中偶氮染料廢水的降解及有效利用。?

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：?

一種藻類微生物高效降解水中偶氮染料的方法，包括從自然水體中篩選藻類微生物，藻類微生物生長條件優化，氧化還原介體催化從自然水體中篩選出的藻類微生物降解水中偶氮染料等過程。本發明中，用從自然水體中篩選出的藻類微生物處理水中不同偶氮染料，并優化其實驗條件，再利用氧化還原介體催化從自然水體中篩選出的藻類微生物降解水中不同偶氮染料，從而構建高效藻類微生物降解水中偶氮染料體系。?

一種藻類微生物降解水中偶氮染料體系的構建方法，其步驟是：?

1.從自然水體中篩選藻類微生物，實驗用培養基組成請見下表(表1)，其步驟是：?

表1.實驗用培養基?

(1)藻類微生物的富集：在18mm×180mm玻璃試管中加入15mL已于121℃滅菌18-22min的富集培養基，接入自然水體水樣1mL，振蕩均勻，加入1mL相同條件下滅菌的液體石蠟，塞入膠塞并用封口膜封口。將已封口的試管置于恒溫光照培養箱中，在照度為3000lux，溫度為28-32℃條件下培養7-10d至培養液呈現綠色。轉移1mL該富集培養液于另一支裝有新鮮滅菌富集培養液的試管中，重復以上操作4-6次。?

(2)分離純化：取1mL步驟(1)中所得富集藻類微生物培養液作10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5，10^-6共6個稀釋梯度，分別接種于半固體培養基中，混勻，加入1mL滅菌后的液體石蠟，塞入膠塞并用封口膜封口。置于恒溫光照培養箱中，在照度為3000lux，溫度為28-32℃條件下培養7-10d至試管中出現藻類微生物群落。?

(3)藻類微生物的篩選：以660nm處吸光度作為衡量藻類微生物濃度指標，將分離得到的藻類微生物群落在試管中培養至A₆₆₀值在1.0以上后分別取1mL培養液接種于血清瓶中，加入橙黃Ⅱ染料(市售，分析純)，使之濃度為5mg/L，調節體系pH值為7.2-7.5，在28-32℃下分別置于照度為3000lux光照條件下培養46-50h，在464nm下測量各吸光度值，以無菌染料溶液作空白。保留具有降解能力的藻種。?

2.確定藻類微生物培養條件，藻類微生物降解濃度為100mg/L橙黃Ⅱ或100mg/L活性紅X-3B(市售，分析純)的最佳培養條件為醋酸鈉濃度5g/L、藻生長時間為46-50h、培養基pH值為7.2-7.5、光照強度為3000lux。?

3.在步驟2中所確定的最佳藻類微生物培養條件下，加入氧化還原介體(氧化還原介體來源為一種氧化還原介體的制備方法，公開號：CN102989505A)使之濃度為10mg/L，在光照強度為3000lux條件下進行濃度為100mg/L橙黃Ⅱ或100mg/L活性紅X-3B或兩種染料混合體系的降解實驗，并與不加入氧化還原介體的空白組進行比較。其降解速率提高約100％。?

本發明與現有技術相比，具有以下優點和效果：?