[發(fā)明專(zhuān)利]用于膽囊癌預(yù)后評(píng)估的ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410255625.2
• 申請(qǐng)日: 2014-06-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104032001B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉穎斌;劉赟;王慧;李茂嵐;張周;李曉光
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31262
• 代理人: 馬偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及用于膽囊癌預(yù)后評(píng)估的ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序方法。

背景技術(shù)

膽囊癌是膽道系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期診斷困難，惡性程度高，發(fā)病的早期即可出現(xiàn)肝臟和周?chē)K器的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移，其確診后僅有15％～47％的切除率，且放化療效果不確切，5年生存率總體僅為5％，根治性切除術(shù)后也只有16.5％左右，預(yù)后極差。膽囊癌的發(fā)生是一個(gè)多基因、多步驟的病變過(guò)程，包括遺傳學(xué)等一系列改變。越來(lái)越多的證據(jù)表明，體細(xì)胞的基因突變?cè)斐傻陌┗蚣せ钆c抑癌基因失活在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著至關(guān)重要的作用，因此，對(duì)于膽囊癌體細(xì)胞突變篩查有助于發(fā)掘其發(fā)病的驅(qū)動(dòng)基因。

由于腫瘤遺傳學(xué)的復(fù)雜性，傳統(tǒng)的體細(xì)胞突變篩查方法無(wú)法對(duì)腫瘤有一個(gè)整體的認(rèn)識(shí)。而作為一種高效和高靈敏度的技術(shù)，全基因外顯子組測(cè)序能發(fā)現(xiàn)外顯子區(qū)的絕大部分的疾病相關(guān)變異，可檢測(cè)常見(jiàn)變異和頻率<5%的低頻突變，通過(guò)對(duì)外顯子區(qū)域的基因突變進(jìn)行測(cè)定，一方面有助于確定膽囊癌相關(guān)癌基因及抑癌基因，為其早期分子診斷提供依據(jù)；另一方面有助于更好地定性腫瘤，揭示相似組織病理類(lèi)型和不同臨床特征的亞臨床分類(lèi)，幫助確定不同亞型膽囊癌的治療敏感性和判斷預(yù)后；更為關(guān)鍵的是，外顯子組測(cè)序技術(shù)有助于尋找膽囊癌基因突變相關(guān)的最佳藥物靶點(diǎn)，從而改變相應(yīng)分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和相關(guān)代謝途徑，使膽囊癌個(gè)體化治療成為可能。

受體酪氨酸激酶超家族(ERBB家族)包括4個(gè)成員：EGFR(ERBB/HER1)、ERBB2(HER2/NEU)、ERBB3(HER3)、ERBB4(HER4)。其中ERBB2沒(méi)有配體，ERBB3因在酪氨酸激酶域重要氨基酸殘基的被取代而缺乏酪氨酸激酶活性。ERBB信號(hào)通路激活機(jī)制如下，配體結(jié)合于受體后，受體二聚化、自我磷酸化，胞內(nèi)相關(guān)蛋白結(jié)合于磷酸化的受體之上，介導(dǎo)下游信號(hào)傳遞。ERBB主要介導(dǎo)以下3條信號(hào)傳導(dǎo)通路：促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(P13K)-AKT、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)物和轉(zhuǎn)錄激活子蛋白3和5通路(STAT3?and?5)，這些信號(hào)最終導(dǎo)致細(xì)胞增殖、遷移和轉(zhuǎn)移，逃逸凋亡或血管發(fā)生，而這些與癌腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

膽囊癌預(yù)后對(duì)于預(yù)見(jiàn)患者可能病程和結(jié)局、指導(dǎo)進(jìn)一步治療有重要意義。然而目前還未見(jiàn)通過(guò)ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序進(jìn)行預(yù)后評(píng)估的方法。另外，ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序也將有助于膽囊癌相關(guān)癌基因及抑癌基因、膽囊癌基因水平的分型等科學(xué)研究，并有助于確定可能的膽囊癌治療靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用于非治療目的的膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序方法。

本發(fā)明的再一的目的是，提供膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序試劑的用途。

本發(fā)明的另一的目的是，提供膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序試劑盒的用途。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種用于非治療目的的膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序方法，包括以下步驟：

????a）采集組織樣本；

b）抽提基因組DNA；

c）制備模板；

d）通過(guò)外顯子組捕獲獲得目標(biāo)文庫(kù)；

e）靶向測(cè)序及生物信息學(xué)分析。

所述的用于非治療目的是指用于確定膽囊癌相關(guān)癌基因及抑癌基因、膽囊癌基因水平的分型和治療靶點(diǎn)的確定。

所述的制備模板具體是通過(guò)固相PCR法。

為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序試劑的用途，用于制備膽囊癌預(yù)后的試劑/試劑盒。

所述的膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序試劑包含DNA抽提試劑、固相PCR試劑、外顯子組捕獲試劑和靶向測(cè)序試劑。

為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序試劑盒的用途，用于制備膽囊癌預(yù)后的試劑/試劑盒。

所述的膽囊癌患者ERBB信號(hào)通路突變靶向測(cè)序試劑盒包含DNA抽提試劑、固相PCR試劑、外顯子組捕獲試劑和靶向測(cè)序試劑。