[發明專利]一種測定藥劑對大豆疫霉根腐病室內防效的實驗方法

在審

• 申請號: 201410254683.3
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN104004816A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 任學祥;葉正和;蘇賢巖;趙偉;鄭雪松
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院植物保護與農產品質量安全研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/645
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技術領域

本發明屬于病害防治試驗方法領域，具體涉及一種測定藥劑對大豆疫霉根腐病室內防效的試驗方法。

背景技術

大豆疫霉根腐病（Soybean?Phytophthora?Root?Rot）是由大豆疫霉菌（Phytophothora?）侵染大豆引起的典型的土傳病害，是大豆生產上的毀滅性病害之一，所造成的損失極為嚴重，在感病品種上可造成損失25%~50%以上，被害種子的蛋白質含量明顯降低。該病害是我國對外檢疫性一類有害生物，也被列入全國農業植物檢疫性有害生物名單。

該病菌在大豆的各個生育階段均可造成危害，包括幼苗出土前的爛種、爛苗和出土后幼苗的猝死，造成幼苗斷壟和成熟前的侵染，或植株矮化甚至枯萎死亡。

一般苗期是大豆最易感病的時期。苗期癥狀表現為近地表植株莖部出現水浸狀病斑，漸變為褐色，細縮，子葉上出現褐色略凹陷的病斑。葉片開始也表現為水漬狀病斑，后變黃萎蔫，葉柄下垂不脫落，感病嚴重時碎倒死亡。成株期植株受侵染后往往在分枝基部發病，出現黑褐色病斑，并不同程度地延至主莖和側枝并向上擴展，可延伸至10~11節位，莖的皮層及髓變褐，中空易折斷。發病植株下部葉一片變黃，隨后上部葉片逐漸變黃并很快萎蔫，根腐爛，根系極少;未死亡病株莢數明顯減少，空莢、癟莢較多，籽粒皺縮，豆莢基部初呈水漬狀，逐漸向端部擴展，致使整個豆莢變褐干枯，空氣濕度較大時，莢皮出現黑色霉層，此為腐生菌二次侵染。成株期感病植株的病莖節位也有病莢產生，其癥狀為綠色，豆莢基部初期出現水漬狀病斑，病斑逐漸變褐并從莢柄向上蔓延至莢尖，最后整個豆莢變枯呈黃褐色，種子失水干癟，種皮、胚和子葉均可帶菌，完全失去使用價值。這種病癥一般成條或成塊發病，很少單株發病。

大豆疫霉病原菌在LBA（利馬豆培養基）、V8培養液或無菌水中可形成大量孢子囊，孢囊梗單生，少有分枝，內生層出型。孢子囊頂生，橢圓形，無乳突，孢子囊不脫落，大小42~65*32~53μm。孢子囊萌發時先形成泡囊，并很快破裂，游動孢子通過裂口釋放。游動孢子卵圓形，雙鞭毛，尾鞭長度為茸鞭的4~5倍，其運動期可持續幾天。游動孢子可直接萌發產生芽管，在接觸固體表面時易膨大形成附著孢，很快就會從附著孢長出菌絲。有時游動孢子萌發可產生第二代游動孢子。游動孢子產生的最適溫度為20℃，最低溫度為5℃，直接萌發的最適溫度為25℃，間接萌發的最適溫度為14℃。

大豆疫霉病原菌的有性生殖為同宗配合。雄器多為長形，側生，偶爾圍生。藏卵器球形或亞球形，壁薄，直徑29~58μm;藏卵器受精后發育成卵孢子，卵孢子球形，壁厚光滑，直徑26~40μm，卵孢子在適宜的條件下萌發產生芽管，芽管隨后形成菌絲或發育成游動孢子囊。卵孢子產生的最適溫度為18~23℃，27℃時萌發最快。

大豆疫霉只能以抗逆性很強的卵孢子在土壤和土壤中的病殘體內越冬并長期生存，其菌絲、孢子囊、游動孢子和休止抱等無性繁殖器官則不能在土壤中長期存活。當春季溫濕度適宜時，卵孢子即打破休眠萌發，產生孢子囊。雨后或灌溉后，孢子囊釋放出大量游動孢子，游動孢子隨流水在田間作較遠距離的傳播，成為初次侵染源。游動孢子受寄主根系分泌物的吸引，朝根系游動并在根組織上休止、萌發，產生壓力胞穿透寄主表皮，在寄主細胞間通過吸器吸取營養，同時在受侵染根系的表面形成大量孢子囊，并將游動孢子釋放到土壤中，隨流水傳播，成為二次侵染源。一旦發病后，由于土壤中始終存在卵孢子，只要條件合適，卵孢子即可萌發形成飽子囊和游動孢子，造成侵染發病。大豆疫霉可通過病殘體，土壤及種子表面粘附的卵孢子，甚至種皮內的卵孢子作遠距離傳播。

在我國，黑龍江、吉林、遼寧、北京、新疆、安徽、山東、河南、江蘇、浙江、福建等地區均有分離到大豆疫霉病原菌的相關報道。近年來，在我國大豆主產區由大豆疫霉引起的根腐病發生范圍逐漸擴大，平均每年以3倍的速度發展，大豆疫霉根腐病正在嚴重威脅我國的大豆生產。

綜合文獻及報道材料，實驗室測定藥劑對大豆疫霉根腐病的盆栽活體測定多采用（1）澆灌菌液接菌法；（2）下胚軸創傷接種法；（3）下胚軸游動孢子接種法；（4）菌層接種法。具體方法步驟介紹如下：

（1）澆灌菌液接菌法

按鄭小波的方法誘發發生孢子囊得到游動孢子懸浮液。主要步驟如下：將在利馬豆培養基上培養的大豆疫霉根腐病菌7~10天后，在培養皿內注入定量無菌水，24?h后重新注入無菌水，48h后收集菌液，將所得菌液對實驗材料進行澆灌，大豆子葉展開后觀察大豆根腐病發生情況。

大豆根腐病的分級標準參照韓慶新、辛惠普的方法

0級：幼苗莖基部和主根上均無病斑。