[發明專利]一種檢測腫瘤免疫標志物BIRC5自身抗體氨基酸序列及應用

無效

• 申請號: 201410254416.6
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN104086640A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 孫世龍;張聰;劉穎;尉軍
• 申請（專利權）人: 深圳市英吉生物科技開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G01N33/68;G01N33/574;G01N33/564
• 代理公司: 長春眾益專利商標事務所(普通合伙) 22211
• 代理人: 趙正

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技術領域

本發明屬于免疫學技術領域，是一種用于制備腫瘤早期診斷試劑和開發治療腫瘤的靶向藥物。

背景技術

大量研究表明，血清或血漿中的腫瘤相關抗原能誘導機體產生自身抗體,?在腫瘤患者血清中既存在腫瘤抗原，也存在針對該腫瘤抗原的自身抗體。因此，?既可以利用抗體檢測腫瘤抗原，也可以利用抗原檢測腫瘤自身抗體。?但在腫瘤發生的早期階段，利用腫瘤自身抗體檢測腫瘤的特異性和敏感性均比利用腫瘤抗原檢測腫瘤要高得多，因為腫瘤抗原的表達只有在中晚期才能達到可檢測水平。此外，很多腫瘤相關抗原不僅在腫瘤患者體內存在，在正常人體內也存在，因此檢測腫瘤相關抗原作為診斷依據可信性差。而自身抗體在正常人體內含量很低，難以檢測或根本不存在。?若體內自身抗體水平明顯增高，則表明體內存在異常免疫反應，表明體內相關抗原水平發生波動，預示疾病的存在或原有疾病加重。

近年來的研究表明，在惡性腫瘤體積發展到可用現代影像學技術檢出之前3-5年，患者血中可出現高濃度的腫瘤相關抗原自身抗體。因此，檢測血中腫瘤相關抗原自身抗體具有預測腫瘤發病風險和早期診斷腫瘤的重要價值。?是腫瘤臨床診斷領域的重點發展方向之一。在國外已有診斷肺癌和乳腺癌的早期診斷試劑盒市售。然而，目前所報道的抗體檢測方法敏感度低，特異性差，假陰性比率可高達50%以上。其主要原因是由于每一種腫瘤相關抗原自身抗體在患者血中的陽性檢測率平均在10%左右。如何提高診斷試劑敏感度是當前需要亟待解決的關鍵問題。比較行之有效的方法是尋找新的可充當腫瘤標志物的自身抗體，然后與現有已知的自身抗體組合成具有敏感度高和特異性強的診斷試劑盒。

BIRC5也被稱為細胞凋亡抑制基因5，是凋亡抑制因子家族的一員，被認為是癌細胞特異性蛋白之一，在幾乎所有的人類腫瘤中都處于一種不受調控的狀態。BIRC5生物學行為表現為抑制細胞凋亡，增強增殖能力，促進血管生成。BIRC5在腫瘤細胞和人胚胎細胞中高表達，但是在已經分化成熟的細胞上幾乎檢測不到。基于BIRC5在腫瘤組織和正常組織間表達的巨大差異和其在腫瘤發展中的重要作用，BIRC5作為一個預測、預后指標和抗癌治療靶點吸引了越來越多的關注。本發明通過自行設計的BIRC5抗原表位多肽，檢測腫瘤患者血清及血漿中自身抗體水平并開發相應的試劑，預測腫瘤發生的危險性，并為腫瘤新藥研究提供可靠的數據。

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發明內容

本發明要解決的技術問題是揭示一種腫瘤免疫標志物-?BIRC5自身抗體，并提供檢測BIRC5自身抗體的抗原多肽。

本發明同時明確了BIRC5自身抗體的用途。

本發明提供的用于檢測腫瘤標志物BIRC5自身抗體的氨基酸序列為：

H-DFLKDHRISTFKNLHHFQGLFPGATSLPVD-OH

H-DTIRRKNLRKLRRKCAVPSSSWLPWIEASGRSC-OH

純度>95%，pH>7.0。

本發明所述的BIRC5抗原多肽在制備預測腫瘤早期診斷試劑盒中的應用。

本發明利用自行設計的BIRC5蛋白的線性多肽，采用ELISA法檢測肺癌，癌患者血清或血漿中抗BIRC5蛋白的特異性IgG抗體。自身IgG抗體水平升高表明腫瘤患者體內BIRC5蛋白的表達量增加，預示患者可能出現原發性或繼發性腫瘤，可以預測腫瘤發生與復發的危險性，指導臨床醫生對腫瘤的早期診斷。

BIRC5蛋白質氨基酸序列見Tab.1

抗原抗體的結合實際上只發生在抗原決定簇和抗體的抗原結合位點之間，兩者在空間結構和空間構型上完全互補。因此抗原決定簇就可以代表整個蛋白與抗體結合的狀態與親和特性。另外，以重組蛋白為抗原，要經過載體構建、轉染、表達、篩選、純化等繁瑣的過程，蛋白空間結構復雜，抗原表位不易暴露，因此抗原抗體結合的特異性差。另外，ELISA法的高靈敏性對純化技術的穩定性要求極高，成本昂貴。

發明人遵循以下原則設計線性多肽抗原：①選擇細胞膜蛋白表面區域；②選擇不形成a-helix的序列；③兩端的肽段比中間的排列合理；④避免蛋白內部重復；⑤避免同源性強的肽段；⑥序列中盡量避免Cys和Glu，不可以有太多的Pro，但有1-2個Pro利于肽鏈結構穩定，對產生特異性抗體有益。此外，該多肽抗原必須含有人類白細胞二類抗原(HLA)系統的限制性表位，包括HLA-DR,?HLA-DP?and?HLA-DQ的限制性表位。這些表位可被90%以上華人群體的HLA二類抗原系統所識別。