[發明專利]一種通過組織培養繁育樹莓苗的方法

有效

• 申請號: 201410250093.3
• 申請日: 2014-06-06
• 公開（公告）號: CN105265310B
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 王貴虹;劉富紅;王貴興
• 申請（專利權）人: 王貴虹
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司21207
• 代理人: 金春華

技術領域

本發明涉及一種種子育苗方法，特別涉及一種通過組織培養高質量繁育樹莓苗的方法。

背景技術

樹莓，又稱覆盆子，屬薔薇科懸鉤子屬，是一種多年生小灌木類落葉果樹。樹莓的適應性廣，長勢強。在我國北方地區分布廣泛，樹莓是當今世界發展最為迅速、集營養與保健于一身的第三代黃金水果。目前對樹莓的研究和開發主要集中于樹莓引種和果實的加工利用。樹莓的繁殖方法分有性繁殖和無性繁殖兩種。有性繁殖變異性大，一般用于培育新品種，無性繁殖以組織培養最為常用。

常規培養基內容物培養出的苗木，繁育能力差，且果實小，易脫落，產量低。通過對接種培養基、增殖培養基及生根培養基配方的調整，可以較好的提高種苗的繁育能力，且種苗栽種后，成果率高，質量好。

發明內容

本發明的目的是提供一種成活率高的通過組織培養繁育樹莓苗的方法。

本發明采用的技術方案是：一種通過組織培養繁育樹莓苗的方法，步驟如下：

1)取帶芽的樹莓苗莖尖，去掉葉片后，用流水沖洗40min；若材料表面帶有絨毛，用皂液或吐溫洗滌后再用流水沖洗40min；

2)消毒處理：消毒處理可以采用三種方法：①將清洗后的材料用70﹪的酒精滅菌10-30s，再用無菌水沖洗5-8次；或，②用70﹪酒精滅菌10s左右，向其中倒入無菌水，使酒精濃度降低至30-40％，滅菌5-10s，再用9-10﹪的次氯酸鈣溶液滅菌5-20min，最后用無菌水沖洗5-8次；或，③用70﹪酒精滅菌10s左右，再用0.1-1﹪的氯化汞溶液滅菌2-10min，最后用無菌水沖洗5-8次。

3)接種培養：經消毒后的材料，在無菌的條件下接種于接種培養基中，于25～30℃下，每天光照約12h，培養20～40天；

優選的，接種培養基是：以MS培養基為基本培養基，每升基本培養基中加入6-芐基嘌呤0.5mg、白砂糖30g和瓊脂粉4g。

4)增殖培養：然后于增殖培養基中，于25～30℃下，每天光照約12h，培養40-50天；

優選的，增殖培養基是：以MS培養基為基本培養基，每升基本培養基中加入6-芐基嘌呤1.0mg和吲哚乙酸0.1mg。

5)生根培養：轉入生根培養基中誘導生根，培養20-30天至每株生根4～6條，根長2～3cm；

優選的，生根培養基是：以1/2MS培養基為基本培養基，每升基本培養基中加入吲哚丁酸0.2mg、康基腺嘌呤0.1mg、白砂糖20g和瓊脂粉4g。

6)煉苗與移栽：將生根苗移到大棚，7天后，用溫水洗干凈瓊脂；

煉苗與移栽根據生根苗的生長勢可以選擇：①對于根系發達、植株健壯、生長勢強的生根苗：將生根苗直接移栽到由栽培土與腐殖土按重量比1:0.5–1:2組成的基質中，上覆蓋塑料拱棚，溫度保持在25℃左右，濕度80﹪～90﹪；②對于生長勢弱的生根苗，將生根苗直接移栽到由細河沙和腐殖土按重量比1:1組成的苗床中，上覆蓋塑料拱棚，溫度保持在25℃左右，濕度80﹪～90﹪。

本發明的有益效果是：本發明通過增殖繁殖進行繼代培養，增殖系數為10～15，可獲得大量無性繁殖的組培苗。通過生根培養，10天后切口處出現明顯的白色根狀突起，20天后，根長2～3cm，每株生根4～6條，生根率高達98﹪。通過煉苗與移栽，采用特殊的基質及合理的栽培條件，移栽成活率可達95﹪以上。

具體實施方式

一種通過組織培養繁育樹莓苗的方法

步驟如下：

1)田間取材：在生長季節，選擇生長健壯、無病蟲害、生長旺盛的帶芽的樹莓苗莖尖，去掉葉片后，分成若干20-30mm的小段，用流水沖洗約40min至干凈，如材料表面帶有絨毛，加入適量皂液或吐溫洗滌，再用流水沖洗40min。

2)消毒處理：消毒處理可以采用三種方法：①將清洗后的材料用70﹪的酒精滅菌10-30s，再用無菌水沖洗5-8次；或，②用70﹪酒精滅菌10s左右，向其中倒入無菌水，使酒精濃度降低至30-40％，滅菌5-10s，然后用9-10﹪的次氯酸鈣溶液滅菌5-20min，最后用無菌水沖洗5-8次；或，③用70﹪酒精滅菌10s左右，再用0.1-1﹪的氯化汞溶液滅菌2-10min，最后用無菌水沖洗5-8次。

3)接種培養：經消毒后的材料，在無菌的條件下剝離出小莖尖，接種于接種培養基中，于25～30℃下，每天光照約12h，培養20～40天；當培養至15～20天時，即可看到開始萌芽，40天左右即可分化出叢生芽；