[發明專利]一種基于核酸適體來檢測目標分子的酶聯分析新策略

在審

• 申請號: 201410249619.6
• 申請日: 2014-06-09
• 公開（公告）號: CN104330563A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 趙秋伶;張振宇
• 申請（專利權）人: 遼寧工程技術大學
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于發夾結構的核酸適體來檢測目標分子的酶聯分析新策略的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將檢測DNA鏈A1固定到NHS活化的酶標板孔。洗滌酶標板。接著用BSA封閉未反應的NHS基團。再次洗滌酶標板。

2)將包含目標分子和B1鏈的樣品溶液加入到固定了A1的酶標板口，室溫反應30-50min后，倒掉反應液，洗滌酶標板。

3)將包含HRP-streptavidin的溶液加入到上步反應完畢的酶標板口，室溫反應30min，倒掉反應液，洗滌酶標板。接著將TMB-H₂O₂底物液加入酶標板口，室溫反應20min，HRP催化TMB-H₂O₂底物顯藍色，加酸終止反應變成黃色。

4)測黃色產物在450nm處的紫外吸收值，根據凈吸收值確定檢測的線性關系。實際樣品的吸收值和標準曲線對照確定目標的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1)中的A1鏈包含靶標的酸適體序列但是比核酸適體序列長，長出來的序列和核酸適體的一段能形成發夾結構。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1)中的A1鏈一端是氨基基團標記的，以便通過和NHS活化基團的反應固定到酶標板口。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于B1能和A1中非核酸適體序列互補配對，并且核酸適體和目標分子結合的能力＞A1形成發夾結構的能力＞兩條DNA互補配對形成雙鏈的能力。沒有目標分子時，而有B1鏈的存在，A1發夾不能打開。當有目標分子時，發夾結構打開，核酸適體和目標分子結合，同時兩條DNA雜交成雙鏈。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于B1的一端事先標記了生物素基團，它能結合HRP-streptavidin，再催化TMB-H₂O₂底物顯色。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于該技術檢測的靶標范圍廣，特別適合小分子檢測。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于該技術是現場快速檢測技術。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：該方法可以被廣泛的應用于醫學診斷、生物分析、食品安全和環境監測等領域中。