[發明專利]一種具有免疫效果的基因

有效

• 申請號: 201410249584.6
• 申請日: 2014-06-07
• 公開（公告）號: CN104004765A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 沙珍霞;陳亞東;曾艷;向晉松;路飏;陳松林;公光業;王天姿;邵長偉
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/435;C12N15/63;A61K48/00;A61K38/17;A23K1/16;A61P31/04;A61P31/12;A01N47/44;A01P1/00
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術領域

本發明屬于功能基因篩選技術領域，具體涉及一種從半滑舌鰨中分離的，與免疫有關的新基因，命名為CsghC1q基因。

背景技術

半滑舌鰨是我國北方及東南沿海重要的海水養殖魚類，具有較高的經濟價值。其人工養殖年產值已達15-20億元人民幣。然而，近年來隨著海水污染問題的加劇而導致陸地周邊養殖環境的不斷惡化，半滑舌鰨養殖規模的不斷擴大，長期使用具有某種優良性狀魚種進行多代近親繁殖等諸多原因導致半滑舌鰨種質發生退化，抗病力下降。海水中存在大量半滑舌鰨致病菌如鰻弧菌，發光桿菌等，病害嚴重直接導致半滑舌鰨的幼苗成熟率低，給半滑舌鰨養殖業帶來了嚴重影響，現在病害問題已經成為制約半滑舌鰨產業發展的瓶頸之一。為了治療及預防疾病，在傳統養殖實踐中通過在飼料中添加化學藥物來實現，不但大大增加了養殖成本，而且導致了藥物殘留問題嚴重，該問題直接影響了半滑舌鰨的商品質量，降低了成品價值，使養殖業遭受了更多的損失。同時大量使用抗生素類藥物提高了致病微生物的抗藥性，進而使其他的海水魚類養殖業面臨同樣嚴峻的挑戰；因此，開發高效綠色低成本的抗病方法是解決該問題的關鍵所在，對免疫基因的研究成果，可作為高抗病性半滑舌鰨家系的篩選依據。將獲取的免疫相關蛋白進行加工制作成綠色環保高效的新型抗病漁用藥物可作為半滑舌鰨治療疾病的新突破點。

魚類是天然免疫和適應性免疫并存的脊椎動物，在魚類對外界刺激及病原生物侵襲的防御反應中，天然免疫起著重要作用。半滑舌鰨的免疫相關基因研究已獲得初步進展。現已完成了對激活免疫反應的部分基因的克隆及表達分析如主要組織相容性抗原(MHC)的IIA、IIB、Iα基因的分子克隆、基因結構及表達分析[Tian-jun?Xu,Song-lin?Chen,Xiang-shan?Ji,et?al.,Fish?and?Shellfish?Immunology,2009,(27):192-201]；Toll樣家族的TLR9的分離及表達鑒定[Yan?Yu,Qi-wang?Zhong,Chun-mei?Li,et?al.,Fish?and?Shellfish?Immunology,2009,(26):492-499]；半滑舌鰨TLR信號通路中重要的信號轉導功能的接頭蛋白髓樣分化分子(MyD88)在不同病原體刺激下的表達模式[沙珍霞,王娜,王啟龍等.中國水產科學,2010,(4):659-670]；半滑舌鰨IRF-7基因的克隆及表達分析[劉萬建,史成銀,宋展等.漁業科學進展,2012,(5):39-47]；同樣可以直接用于清除病原菌或病原物的免疫反應下游基因如鵝型溶菌酶在不同組織的表達模式也得到了初步研究[Zhen-xia?Sha,Qi-long?Wang,Yang?Liu,Fish?and?Shellfish?Immunology,2012,(32):914-921]。根據相應的研究結果結合育種方法可以篩選獲得高抗病性半滑舌鰨家系，提高半滑舌鰨養殖經濟效益。然而先前進行的研究多集中于對免疫基因的克隆及表達分析，對于基因的功能性研究還極度匱乏，不利于后續綠色藥物及抗體的開發。

魚類補體系統是天然免疫系統的關鍵組分，其中，C1q(Complement1q)是補體系統經典途徑的重要識別分子，能夠啟動經典途徑,并且在固有免疫和特異性免疫之間發揮主要的連接作用[Kishore?U,Reid?KB.Immunopharmacology,2000,49(1-2):159-170]。除此以外，眾多含有與補體C1q分子類似的C1q球狀結構域(C1q?domain-containing?protein,C1qDC?protein)的非補體蛋白分子，共同組成了一個嶄新的C1q蛋白家族[Kishore?U,Reid?KB.Immunopharmacology,1999,42(1-3):15-21；Kishore?U,Gaboriaud?C,Waters?P,et?al.Trends?Immunol,2004,25(10):551-561]，C1qDC蛋白包含一些非常重要的信號傳導分子，在適應性免疫調節、炎癥調節和維持機體平衡等方面發揮關鍵作用[Ghebrehiwet?B,Hosszu?KK,Valentino?A,et?al.Front?Immunol,2012,3:52]，有些C1qDC蛋白可作為藥物開發的重要靶點,具有成為新型治療藥物的潛力。ghC1q蛋白是C1qDC蛋白中的一類，在物種中含量豐富,具有非常重要的功能。在魚類中，關于C1qDC蛋白的研究報道很少，關于補體分子ghC1q的克隆、表達變化、重組蛋白制備及活性分析則未見報道。

發明內容