[發(fā)明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒膠體金快速檢測試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410249217.6
• 申請日: 2014-06-06
• 公開（公告）號: CN103995136B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發(fā)明（設計）人: 李建;漆世華;謝紅玲;溫文生;韓興;舒銀輝;廖園園;劉潔;秦紅剛;徐松;牟林琳;朱薇;馮釗
• 申請（專利權）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙)42222
• 代理人: 常海濤

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技術領域

本發(fā)明屬于動物病毒性疾病監(jiān)測和診斷試劑領域，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒膠體金快速檢測試紙條。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS）俗稱藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome?virus，PRRSV）引起的一種以母豬繁殖障礙、仔豬出現呼吸道疾病為特征的傳染病。是世界動物衛(wèi)生組織（Office?International?DesEpizooties，OIE）列入的93種法定報告的動物疫病之一。據統(tǒng)計，該病每年給美國的養(yǎng)豬業(yè)造成近5.6億美元的經濟損失（Cho?and?Dee,?2006）。我國于1996年從流產胎兒中分離到PRRSV，證實我國也存在豬繁殖與呼吸綜合征。隨著病毒的遺傳和變異，2006年，我國又爆發(fā)了以變異美洲型病毒為病原的高致病性豬藍耳病（Tian?K?et?al.,?2007），使我國養(yǎng)豬業(yè)蒙受了巨大的經濟損失。

目前檢測PPRSV的方法主要有RT-PCR法、病毒分離鑒定、免疫組化法、間接免疫熒光試驗和血清中和試驗等診斷方法，但這些方法要么需要操作活病毒，要么操作復雜、耗時長，要么特異性和敏感性不足，不利于基層的應用和推廣。

病毒檢測方法：

1、血清學試驗

血清學方法是目前廣泛應用于實驗室的檢測方法。目前國內外已經建立了4種檢測PRRS抗體的方法。

1）免疫過氧化物酶單層試驗（IPMA）

IPMA是廣泛應用于該病診斷的一種方法，敏感性和特異性都比較好，可用于PRRSV抗原的檢測，病毒鑒定及血清抗體檢測。目前該方法在歐美等國家已經廣泛應用于PRRSV感染的研究中。試驗主要在Marc-145培養(yǎng)物上進行。IPMA能在感染后6天血清中檢測到PRRSV抗體，具有較高的特異性。

2）間接熒光抗體試驗（IFA)

免疫熒光抗體染色技術是應用異硫氰酸熒光素標記，建立了免疫熒光抗體技術用于直接檢測仔豬肺組織中的抗原。有的直接采集小豬的肺泡巨噬細胞進行直接培養(yǎng)，用病毒特異性熒光抗體進行檢測。

3）血清中和試驗（SN）

SN檢測PRRSV抗體雖然特異性良好，但PRRSV的SN抗體比IFA抗體在血清中出現的晚，對急性感染的敏感性差，因此SN不適合做早期診斷，而且細胞培養(yǎng)工作量大、技術性強，目前僅適于實驗室研究用。作為經典方法在病毒鑒定中起著重要的作用，許多新的檢測方法都要以此作為標準進行比較。

4）間接酶聯免疫吸附試驗（間接ELISA)

ELISA靈敏度高，特異性好，制好的診斷膜片常溫下保存時間長，攜帶寄送方便，操作簡便，快速，不需要特殊實驗條件，反應板可重復使用多次，結果客觀，肉眼易于判斷。

2、分子生物學診斷技術

利用RT-PCR、核酸探針、序列測定和原味雜交等方法對PRRSV進行分子診斷和分型，從分子水平揭示抗原變異的基礎和毒種演化過程。RT-PCR擴增病毒基因組的通用引物分別針對歐美毒株的特異性引物進行分型鑒定。嵌套性RT-PCR中同時使用通用引物和特異性引物在一次PCR反應中即可進行分型診斷。

膠體金免疫層析法（Immunochromatography?Assay）始于上世紀90年代中期，是在免疫滲濾法的基礎上發(fā)展起來的。它是免疫親和技術、印記技術、免疫標記技術和層析技術的結合。將包被抗原、將包被抗原、膠體金標記抗體固相化，與樣本吸附材料等組合在一起，制備為免疫層析診斷試紙條，使用時只需要將試紙條插入樣本溶液，數分鐘就可以判斷結果。與免疫滲濾法比較，穩(wěn)定性好，操作更簡便、快速，且由于試紙條形式，無需低溫保存，儲運方便。

針對豬藍耳病的流行現狀和防治要求，對于豬藍耳病的診斷，不但要求高的特異性和敏感性，還需要快速、簡便、易于基層醫(yī)療和衛(wèi)生單位使用。

發(fā)明內容

本發(fā)明的首要目的在于提供一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒膠體金快速檢測試紙條，該試紙條使用方便、快捷，可檢測豬標本中豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原，用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒的輔助診斷。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述豬繁殖與呼吸綜合征病毒膠體金快速檢測試紙條的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述豬繁殖與呼吸綜合征病毒膠體金快速檢測試紙條的應用。

本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現：?