[發明專利]一種液相色譜-酶電極聯用裝置及其應用

有效

• 申請號: 201410248217.4
• 申請日: 2014-06-05
• 公開（公告）號: CN104007219A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 壽旦;王娜妮;張揚;董宇
• 申請（專利權）人: 浙江省中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N27/26
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及一種屬于藥物領域，尤其涉及一種液相色譜-酶電極聯用裝置及中藥成分-活性在線分析應用。

背景技術

隨著中藥產業規模的擴大及中藥研究成果的發展，中藥分析技術取得了極大進展，中藥分析的對象更集中于針對中醫藥現代化研究中的關鍵科學問題；同時中藥分析需要將各種新方法、新技術整合使之成為解決關鍵科學問題的新體系，而不再局限于分析中藥的物質組成,?更注重解決的是物質的組成及其功能的相關性。整體系統生物學(GlobalSystems?Biology)的發展，系統揭示化學物質組的變化與生物系統應答的時空響應的相關性；以及基于代謝組學的方藥指紋-藥代標示物-藥效靶標三維模式的中藥復方代謝的研究設想，均體現了改進現有中藥分析新技術，整合分析方法應用的發展趨勢。

中藥成分分析技術在以往的液相色譜、氣相色譜、薄層色譜的基礎上，發展了氣相-質譜聯用、液相-質譜聯用乃至色譜-核磁聯用等技術，在對中藥復雜成分進行分離分析的同時提供了豐富的結構信息，實現了中藥中已知或未知成分的定性定量分析，極大地推進了中藥成分化學研究，但是現有的分析技術均以化學成分研究為目的，無法在線反應或評價成分的生物活性。因此，選擇與中藥功效相關的酶蛋白分子，通過物理化學交聯作用固定化做成固定化酶膜，然后與電化學傳感器結合構成酶電極（enzyme?electrode），利用酶反應的專一性、穩定性以及電化學分析的快速、靈敏，在線、實時提供分析樣品中各成分的生物活性。酶電極聯合液相分析，能夠突破現有分析技術中成分活性信息的缺失，為建立新的中藥質量評價模式提供思路和技術方案。

電極分析法（包括酶電極）作為一種電化學檢測手段，已經成功實現與離子色譜的在線聯用。但由于液相色譜流動相中有機溶劑的存在，限制了酶電極與液相色譜的聯用。若將有機溶劑去除裝置連接于液相色譜和酶電極之間，將流動相中有機溶劑去除，則可實現液相色譜與酶電極的聯用。

在色譜分析中，濃縮富集是樣品的常規前處理手段，即在樣品進色譜柱分離之前進行濃縮富集。也有柱后濃縮富集的，比如液相色譜-質譜聯用法（LC-MS）及液相色譜-蒸發光散射法（LC-ELSD），但它們都是質量型檢測器而非濃度型檢測器。若在常規濃度型檢測器之后連接一個溶劑去除裝置，采用具有多孔性和疏水性的多孔聚四氟乙烯膜及中空纖維膜作為滲透膜，允許有機溶劑滲透，能夠實現溶劑去除，并達到樣品組分的濃縮目的，為進一步的活性評價提供基礎。有機溶劑去除裝置設計：流動相通過多孔滲透膜管時，在管壁外圍流過已加熱的干燥氣體（比如空氣或氮氣），有機溶劑受熱揮發為氣態，透過滲透膜去除。

中藥成分組成復雜，常規的分析技術在中藥的定性、定量分析中發揮了中藥作用，但目前尚未見能夠同時提供中藥成分組成與組分一一對應的活性信息的分析方法。本發明專利以小型化固定化酶電極為活性評價靶標，通過色譜分離-檢測器-在線溶劑去除-酶電極檢測各部件的整合，形成中藥在線成分-活性評價實驗裝置，并利用該裝置，開展白術的中藥成分-活性在線評價應用。分析結果將同時提供中藥成分組成信息以及與酶電極作用的活性信息，該在線分析結果，結合化學成分鑒定結果，將全面提供白術成分-活性信息，能夠為闡述白術藥效作用機制提供新的技術方法。同時該技術能夠推廣應用至其他中藥，能夠進一步加強與中醫理論相結合的有效成分研究，最終建立一種新的以成分、活性為綜合指標的中藥質量評價體系，通過加強質控，提高中藥材質量，促進中藥產業發展。

發明內容

為了解決上述的技術問題，本發明的一個目的是提供一種液相色譜-酶電極聯用裝置，通過該裝置可以得到待測樣品中的成分組成信息，并進一步明確各組分對應的酶結合活性，得到成分-活性在線評價結果。本發明的另外一個目的是提供采用上述的裝置進行中藥成分-活性在線分析的方法。

為了實現上述的第一個目的，本發明采用了以下的技術方案：

一種液相色譜-酶電極聯用裝置，該裝置包括色譜分離單元、檢測器、有機溶劑去除單元、活性評價單元和計算機，所述的色譜分離單元包括依次通過管路相互連接的流動相儲罐、色譜泵、進樣閥和液相色譜柱，液相色譜柱通過管路連接所述的檢測器；所述的有機溶劑去除單元用于去除樣品中的有機溶劑，有機溶劑去除單元的前端連接檢測器；所述的活性評價單元包括混合器、緩沖液儲罐和酶電極，混合器與有機溶劑去除單元的后端相連接，緩沖液儲罐連接至混合器，混合器連接至酶電極；所述的計算機分別電連接所述的檢測器與酶電極。

作為優選，所述的色譜分離單元采用高效液相色譜分離系統或超高壓液相色譜分離系統。