[發明專利]一種用全局轉錄機制工程構建有機溶劑耐受型大腸桿菌的方法有效
| 申請號： | 201410247513.2 | 申請日： | 2014-06-06 |
| 公開（公告）號： | CN104004779A | 公開（公告）日： | 2014-08-27 |
| 發明（設計）人： | 倪曄;錢曉紅;張法 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122 江蘇省無錫市濱*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 全局 轉錄 機制 工程 構建 有機溶劑 耐受 大腸桿菌 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種獲得高有機溶劑耐受性菌株的定向改造方法，其特征在于步驟為：
（1）以攜帶野生型rpoD基因的pHACM質粒為模板進行隨機突變，獲得rpoD突變基因；
（2）以rpoD突變基因為引物，pHACM為模板，全質粒擴增構建σ70基因突變庫；
（3）轉化大腸桿菌進行高通量篩選，以環己烷為有機溶劑壓力，進行液體和瓊脂平板交替篩選。
2.用權利要求1所述方法獲得的高有機溶劑耐受性改善的σ70突變基因rpoDM1，其特征在于：
（1）該σ70突變基因rpoDM1攜帶三個突變位點，分別為Asp39Glu，Ala72Val和Thr94Met，其中123位突變產生終止密碼子；
（2）攜帶該σ70突變基因rpoDM1的大腸桿菌E.?coli?JM109/pHACMC9能耐受v/v?69%環己烷，而普通大腸桿菌在v/v?1%環己烷條件下就停止生長。
3.根據權利要求1所述的獲得高有機溶劑耐受性菌株的定向改造方法，其特征在于：可適用各種微生物菌株的不同轉錄因子的定向改造。
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