[發明專利]一種與綿羊產羔數性狀相關的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201410246539.5
• 申請日: 2014-06-05
• 公開（公告）號: CN104046626A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 李發弟;王維民;翁秀秀;劉世佳;潘香羽;馬友記;唐德富;李沖
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 王加嶺;李濤

技術領域

本發明屬于家畜分子標記制備技術領域，具體涉及一種作為綿羊標記輔助選擇應用的與綿羊產羔數性狀相關的分子標記的制備方法及其應用。

背景技術

根據FAO（2012）的統計數據，我國現有綿羊1.87億只，占世界飼養量（11.69億只）的16%，居世界首位（http://www.fao.org/home/en/），是最大的羊肉生產和消費國。綿羊的群體遺傳改良對保障羊肉供給，促進國民經濟發展和提高人們生活水平具有重要意義。綿羊的繁殖性狀，尤其產羔數是現代養羊生產中最重要的經濟性狀之一。隨著國家生態保護戰略的實施，放牧養羊的空間越來越小，要滿足不斷增加的羊肉市場需求，只能增加舍飼養羊的數量。舍飼養羊的成本中，母羊飼養的成本占飼養成本的60%以上，提高每只母羊的產羔數能顯著增加養羊生產者的經濟效益。我國部分地方綿羊品種具有一年四季發情、產羔率高等優良種質特性，其中湖羊和小尾寒羊尤為突出。由于我國地域遼闊、生態經濟條件多樣，養羊生產受自然條件的制約比較明顯，羊肉生產的主體仍是適應性強、繁殖力低、產肉性能低的地方品種及其雜種群體。同時，盡管湖羊和小尾寒羊等品種繁殖性能突出，已經成為原產區乃至部分引種成功地區規模化舍飼養羊的當家母本，由于其肉用性能與國外引進的專門化肉用品種相比仍有很大的差距，在繁育體系不健全、雜交無序的雜種優勢利用方式下，相當一部分群體容易在引入地被國外引進的專門化肉用品種改良，其中二代以上的雜種群體繁殖性能明顯下降。顯然，我國綿羊群體的繁殖性能總體仍然比較低，在舍飼養羊比重不斷增大的大背景下，繁殖性能和產肉性能的遺傳改良是當前乃至今后一段時間內我國綿羊群體遺傳改良的重點，而繁殖性能遺傳改良的重點應放在產羔數性狀上。

繁殖性狀屬閾性狀，是一種低遺傳力（平均0.1）的性狀，并且在不同環境和不同飼養條件下產羔數也受到一定影響，因此常規育種方法遺傳改良進展緩慢，亟需人們加深對繁殖性狀遺傳機制的了解，以促進綿羊繁殖性狀的遺傳改良。繁殖性狀受微效多基因控制，而且為加性-顯性基因作用模式。隨著現代分子生物技術的發展，分子標記已在綿羊生產中廣泛應用，并取得了一定成績。對于綿羊繁殖性狀候選基因的研究，最早且作用機制相對最清楚的是FecB基因，它是于1980年由Davis在Booroola綿羊的常染色體上發現的，具有提高排卵率和產羔數等生物學作用（Davis?GH等，Segregation?of?a?major?gene?influencing?fecundity?in?progeny?of?Booroola?sheep.?NZJ?Agric?Res,?1982,?25:525-529；C.J.H.Souza等，Secretion?of?Inhibin?A?and?Follicular?Dynamics?throughout?the?Estrous?Cycle?in?the?Sheep?with?and?without?the?Booroola?Gene(FecB).?Endocrinology,?1997,?138(12):5333-5340）。之后，Mulsant等和Wilson等幾乎同時報道了將FecB基因定位于綿羊6號染色體6q23-31，并發現該基因是由于BMPR-IB基因高度保守的胞內激酶信號區域一個突變（Q249R）的結果（Wilson?T等，Highly?prolific?Booroola?sheep?have?a?mutation?in?the?intracellular?(ALK-6)?that?is?expressed?in?both?oocyte?sand?granulosa?cells.?Biol?Reprod,?2001,?1225-1235；Mulsant?P等，Mutation?in?bone?morphogenetic?protein?receptor-IB?is?associated?with?increased?ovulation?rate?in?Booroola?Merino?ewes.?Proc?Natl?Acad?Sci?USA,?2001,?98:?5104-5109）。Souza等將Booroola羊與普通綿羊的cDNA進行比對時發現830bp處有一個A>C突變，使BMPR-IB的胞內信號區第249位氨基酸由Glu變成Arg（Q249R），從而導致Booroola母羊出現超多產羔數基因型（Souza?C?J等，The?Booroola?(FecB)?Phenotype?is?assoeiated?with?a?mutation?in?the?bone?morphogenetic?receptor?type?IB?(BMPR-IB)?gene.?J?Endoerinol,?2001,?169(2):1-6）。隨后FecXI、FecXH、FecX2W、GDF9等影響綿羊繁殖性狀的候選基因相繼被鑒定出來，其中FecXI、FecXH?被定位于Xp11.2-p11.4（Davis?G?H.?Discovery?of?the?inverdale?gene?(fecXI).?Proceeding?of?the?New?Zealand?Society?of?Animal?Production,?1995(55):289-290）。儲明星等采用PCR-SSCP的方法對BMP4基因進行多態性分析，發現其也是影響小尾寒羊產羔數的基因（Chun?M?X等，Polymorphism?of?BMP4?Gene?and?Its?Relationship?with?Prolificacy?of?Small?Tail?Han?Sheep.?Journal?of?Agricultural?Biotechnology.?2008,?16(2):237-241）。董文艷等采用同樣的方法發現ESR基因對湖羊產羔數也有顯著的影響（董文艷.?湖羊ESR基因的檢測及基因型與多態性能的關系.?杭州：浙江大學.?2009）。