[發(fā)明專利]一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410245469.1
• 申請日: 2014-06-04
• 公開（公告）號: CN104046582A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐成斌;王聞燁;東天;馬溪平;孟雪蓮;李鮮珠
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/38
• 代理公司: 沈陽杰克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 楊乃力

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種富集細(xì)菌的培養(yǎng)基，具體涉及一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

耳炎假單胞菌(Pseudomonas?otitidis.)是在2006年鑒定出的新型假單胞菌屬的菌株，該菌株第一次是從感染的人耳臨床樣本中分離得到的，一種致病力較低但抗藥性強(qiáng)的桿菌。該菌株是一種條件致病菌，只在某種特定條件下才能致病。并且耳炎假單胞菌具有潛在工業(yè)運(yùn)用的標(biāo)志性特征，該菌株可用于水體凈化，具有好氧反硝化的功能，營養(yǎng)需求簡單，因此，應(yīng)用前景十分廣闊，耳炎假單胞菌可降解廢水中的一些污染物質(zhì)，因此又具有很高的研究和應(yīng)用價(jià)值。耳炎假單胞菌的推廣和應(yīng)用，關(guān)鍵在于需要合適的培養(yǎng)基質(zhì)，由于耳炎假單胞菌生長期過慢，目前采用的富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，其平均富集時(shí)間為28～35d，周期均較長。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷和不足，本發(fā)明提供一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)富集耳炎假單胞菌，培養(yǎng)速度快，成本低。彌補(bǔ)了耳炎假單胞菌生長期過慢等方面的不足之處，提高了生長速率，使達(dá)到最大生長量的時(shí)間縮短了9～11個小時(shí)。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、葡萄糖、碳酸氫鈉、蛋白胨、硝酸銨、酵母膏和維生素D，每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入葡萄糖1.0～5.0g、碳酸氫鈉0.1-0.5g、蛋白胨1.0～5.0g、硝酸銨0.1-0.5g、酵母膏0.05～0.1g和維生素D0.05～0.1g。

優(yōu)選的，每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入葡萄糖3.0g、碳酸氫鈉0.3g、蛋白胨3.0g、硝酸銨0.3g、酵母膏0.07g和維生素D0.07g。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基是假單胞菌的常用培養(yǎng)基。可以選用現(xiàn)有技術(shù)中經(jīng)常用的，并已公開的假單胞菌培養(yǎng)基。

利用上述的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)耳炎假單胞菌的方法：將上述富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7.0～7.2，121℃滅菌30min，將耳炎假單胞菌按1％的接種量接種于富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基中，振蕩混勻，在溫度為30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

葡萄糖對耳炎假單胞菌的生長量的影響隨著葡萄糖的濃度的增加而增大，經(jīng)過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)葡萄糖的用量為3.0g/L時(shí)(每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入3.0g)，其菌體繁殖速度很快，菌液OD₆₀₀達(dá)1.50，當(dāng)葡萄糖的用量小于3.0g/L時(shí)，菌液OD₆₀₀小于1.50。因此，葡萄糖的用量以3.0g/L為宜。

碳酸氫鈉對耳炎假單胞菌的生長量的影響隨著碳酸氫鈉的濃度的增加而增大，經(jīng)過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)碳酸氫鈉的用量為0.3g/L時(shí)(每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0.3g)，其菌體繁殖速度很快，菌液OD₆₀₀達(dá)1.50，當(dāng)碳酸氫鈉的用量小于0.3g/L時(shí)，菌液OD₆₀₀小于1.50。因此，碳酸氫鈉的用量以0.3g/L為宜。

蛋白胨對耳炎假單胞菌的生長量的影響，隨著蛋白胨的濃度的增加而增加，經(jīng)過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)?shù)鞍纂说挠昧繛?.0g/L(每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入3.0g)時(shí)，其菌體繁殖速度很快，菌液OD₆₀₀達(dá)1.50，當(dāng)?shù)鞍纂说挠昧看笥?.0g/L時(shí)，菌液OD₆₀₀小于1.50。因此，蛋白胨以3.0g/L為宜。

硝酸銨對耳炎假單胞菌的生長量的影響隨著硝酸銨的濃度的增加而增大，經(jīng)過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)硝酸銨的用量為0.3g/L時(shí)(每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0.3g)，其菌體繁殖速度很快，菌液OD₆₀₀達(dá)1.50，當(dāng)硝酸銨的用量小于0.3g/L時(shí)，菌液OD₆₀₀小于1.50。因此，硝酸銨的用量以0.3g/L為宜。

酵母膏對耳炎假單胞菌的生長量的影響，隨著酵母膏的濃度的增加而增加，經(jīng)過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)酵母膏的用量為0.07g/L(每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0.07g)時(shí)，其菌體繁殖速度很快，菌液OD₆₀₀達(dá)1.50，當(dāng)酵母膏的用量大于0.07g/L時(shí)，菌液OD₆₀₀小于1.50。因此，酵母膏以0.07g/L為宜。