[發(fā)明專利]早期膀胱癌血清miRNAs特異表達(dá)譜及診斷模型

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410245237.6
• 申請(qǐng)日: 2014-06-05
• 公開（公告）號(hào): CN103993093A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王傳新;杜魯濤;蔣秀梅;張欣;楊詠梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)齊魯醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及早期膀胱癌血清miRNAs特異表達(dá)譜，其逆轉(zhuǎn)錄引物和檢測(cè)引物，以及診斷模型，屬于醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在我國其發(fā)病率和死亡率均居泌尿系統(tǒng)腫瘤的首位，且近年有逐漸上升的趨勢(shì)。20％-30％的膀胱癌病人初診時(shí)已發(fā)生肌層浸潤，而在最初診斷為非侵襲性膀胱癌的病人中，約15％的膀胱癌病人五年內(nèi)發(fā)展為侵襲性膀胱癌。因此，早期診斷和早期治療是改善膀胱癌預(yù)后、降低死亡率的關(guān)鍵。目前，用于膀胱癌的診斷方法主要包括膀胱鏡、尿脫落細(xì)胞學(xué)及影像學(xué)檢查等。膀胱鏡檢查雖然具有較高的診斷效能，但該檢查方法的有創(chuàng)性限制了其在膀胱癌篩查中的廣泛應(yīng)用；尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查雖特異性較高，但敏感性較低，尤其對(duì)低分級(jí)腫瘤的敏感性僅為20％～40％，且易受監(jiān)測(cè)這主觀因素的影響；CT和超聲檢查不易發(fā)現(xiàn)膀胱內(nèi)較小的病變，對(duì)膀胱癌分期預(yù)測(cè)具有一定的有限性。尋找臨敏感性高和特異性高的早期腫瘤標(biāo)志物，建立一種安全有效的血清學(xué)膀胱癌診斷方法是臨床亟待解決的難題。

MicroRNA(miRNAs)是一類廣泛分布于真核生物的高度保守的、非蛋白編碼的單鏈小分子RNAs，通過對(duì)靶mRNA降解或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞分化、生長、代謝和凋亡等功能。以往研究證實(shí)，miRNAs在腫瘤中異常表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后存在密切的聯(lián)系。近年來研究發(fā)現(xiàn)，血清中存在豐富且穩(wěn)定的miRNAs，通過對(duì)比分析腫瘤患者和對(duì)照組血清中miRNAs表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)不同腫瘤具有其特定的miRNAs表達(dá)譜，為腫瘤的無創(chuàng)性早期診斷提供了新的依據(jù)。因此，確定膀胱癌miRNAs特異表達(dá)譜，篩選差異表達(dá)的miRNAs，建立膀胱癌血清miRNAs診斷模型，有助于實(shí)現(xiàn)對(duì)膀胱癌的早期診斷。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了膀胱癌患者血清miRNA特異表達(dá)譜，及其逆轉(zhuǎn)錄引物和檢測(cè)引物、檢測(cè)試劑盒，以及診斷模型，為臨床上膀胱癌的早期發(fā)現(xiàn)和早期治療提供支持。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一種早期膀胱癌miRNAs特異表達(dá)譜，由上調(diào)表達(dá)的miR-152,miR-148b-3p以及下調(diào)表達(dá)的miR-3187-3p，miR-15b-5p,miR-27a-3p，miR-30a-5p構(gòu)成。

所述miRNAs來自外周靜脈血的血清。

所述膀胱癌miRNAs特異表達(dá)譜中特異表達(dá)miRNAs的逆轉(zhuǎn)錄引物和檢測(cè)引物，如下：

((1)miR-152的逆轉(zhuǎn)錄引物和前向檢測(cè)引物：逆轉(zhuǎn)錄引物的序列如SEQIDNO：1所示，前向檢測(cè)引物的序列如SEQIDNO：2所示：

SEQIDNO：1：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCAAGTTC-3’；

SEQIDNO：2：5’-ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATGACAGA-3’；

(2)miR-148b-3p的逆轉(zhuǎn)錄引物和前向檢測(cè)引物：逆轉(zhuǎn)錄引物的序列如SEQIDNO：3所示，前向檢測(cè)引物的序列如SEQIDNO：4所示：

SEQIDNO：3：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAAAGTT-3’；

SEQIDNO：4：5’-ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATCACAGAA-3’；

(3)miR-3187-3p的逆轉(zhuǎn)錄引物和前向檢測(cè)引物：逆轉(zhuǎn)錄引物的序列如SEQIDNO：5所示，前向檢測(cè)引物的序列如SEQIDNO：6所示：

SEQIDNO：5：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCGCGCAG-3’；

SEQIDNO：6：5’-ACACTCCAGCTGGGTTGGCCATGGGGCT-3’；

(4)miR-15b-5p的逆轉(zhuǎn)錄引物和前向檢測(cè)引物：逆轉(zhuǎn)錄引物的序列如SEQIDNO：7所示，前向檢測(cè)引物的序列如SEQIDNO：8所示：

SEQIDNO：7：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGTAAACC-3’；

SEQIDNO：8：5’-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACATCATGG-3’；