[發(fā)明專利]一種兼抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病番茄育種材料的選育方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410244187.X
• 申請日: 2014-06-05
• 公開（公告）號: CN103999767A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王富;李文麗;王輝
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于番茄育種方法領(lǐng)域，尤其是一種抗病毒能力強、提高產(chǎn)量的兼抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病番茄育種材料選育方法。?

背景技術(shù)

由番茄根結(jié)線蟲(Meloidogyne?spp.)引起的番茄根結(jié)線蟲病是嚴重影響設(shè)施番茄生產(chǎn)的一種重要的土傳病害，由煙粉虱(Bemisia?tabaci)介導(dǎo)侵染番茄的番茄黃化曲葉病毒(Tomato?yellow?leaf?curl?virus，TYLCV)是近年來嚴重影響番茄生產(chǎn)的重要病毒性病害之一。隨著我國番茄栽培特別是設(shè)施栽培面積的不斷增加以及連作年限的增長，加劇了這兩種病害的同時爆發(fā)，造成番茄嚴重減產(chǎn)。?

目前，國內(nèi)外在番茄抗根結(jié)線蟲病育種方面取得一定成就但進展依然緩慢，難以有效地選育抗根結(jié)線蟲品種。其主要原因是番茄根結(jié)線蟲存在多個生理小種，尚未發(fā)現(xiàn)對多個生理小種均表現(xiàn)抗性的種質(zhì)資源。?

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，國內(nèi)外學(xué)者相續(xù)開展了番茄抗根結(jié)線蟲基因定位研究。目前在番茄中共發(fā)現(xiàn)了9個根結(jié)線蟲抗性基因，分別為Mi-1、Mi-2……Mi-9，對這些抗性基因的研究可以加快抗病新品種的選育(tgrc.ucdavis.edu)。在這9個基因中僅有Mi-1得以克隆，同時Mi-1基因特異分子標(biāo)記的開發(fā)大大提高了分子標(biāo)記輔助選擇的效率(Milligan?S?B，et?al.The?root?knot?nematode?resistance?gene?Mi?from?tomato?is?a?member?of?the?leucine?zipper，nucleotide?binding，leucine-rich?repeat?family?of?plant?genes[J].Plant?Cell，1998，10(8)：1307-1319)。?

番茄對黃化曲葉病毒的抗性基因主要來源于野生番茄中的多毛番茄(S.habrochaites)、醋栗番茄(S.pimpinellfium)、秘魯番茄(S.?peruvianum)、智利番茄(S.chiense)和契斯曼尼番茄(S.cheesmanii)，利用這些野生材料定位到Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-4和Ty-5等抗病基因(楊曉慧.番茄抗黃化曲葉病基因Ty-2的精細定位即不同抗性基因效應(yīng)比較[D]，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2012，博士論文)。有研究發(fā)現(xiàn)，只含有Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-4和Ty-5任何一個抗性基因的番茄株系，均對番茄黃化曲葉病表現(xiàn)出一定的抗性，但抗性水平不等。其中，Ty-3基因?qū)κ澜绮煌貐^(qū)不同的番茄黃化曲葉病毒中均具有較高的抗性，除了抗TYLCV還抗ToMoV，即使在至少7種病毒復(fù)合侵染的危地馬拉仍然表現(xiàn)出高水平的抗性(Ji?Y，et?al.Ty-3，a?begomovirus?resistance?locus?near?the?tomato?yellow?leaf?curl?virus?resistance?locusTy-1on?chromosome6of?tomato.Mol.Breed.，2007，20：271-284.)。?

近年來，盡管對番茄抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病抗病基因研究取得了較大進展，也開發(fā)了一些與抗病基因緊密連鎖的標(biāo)記，但是在利用這些連鎖標(biāo)記輔助選擇方面的應(yīng)用還遠遠沒有普及。分子標(biāo)記與常規(guī)育種完美結(jié)合是實現(xiàn)高效育種的絕佳途徑。?

培育和種植抗病品種是防治植物病害最經(jīng)濟有效的方法之一，選育抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病的番茄品種在蔬菜生產(chǎn)中具有重要的應(yīng)用價值。目前尚無高效選育兼抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病番茄育種材料的方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抗病毒能力強、提高產(chǎn)量的兼抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病番茄育種材料選育方法。?

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種兼抗根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病番茄育種材料選育方法，其特征是包括下列步驟：?

(1)以抗根結(jié)線蟲病番茄純合材料和抗黃化曲葉病毒病番茄純合材料進行雜交，并構(gòu)建F₂群體；?

(2)從所述步驟(1)F₂群體中采用分子標(biāo)記方法對根結(jié)線蟲病和黃化曲葉病毒病兩抗病位點均表現(xiàn)純合的單株進行篩選；?

(3)對步驟(2)中兩個抗病位點均表現(xiàn)純合的單株進行嚴格自交，采用單粒傳方式進行選擇，從F₅代開始，用均勻分布于12條染色體的120對SSR引物對所選材料遺傳背景的純合性進行鑒定，直?至絕大多數(shù)位點表現(xiàn)純合為止停止自交；?