[發明專利]一種凝結芽孢桿菌檢測引物組、試劑盒及其方法有效
| 申請號： | 201410243762.4 | 申請日： | 2014-06-04 |
| 公開（公告）號： | CN104152543A | 公開（公告）日： | 2014-11-19 |
| 發明（設計）人： | 符雷;郗洪生;施騰鑫;陸亞怡 | 申請（專利權）人： | 江蘇恒豐強生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產權代理有限公司 31253 | 代理人： | 丁清鵬 |
| 地址： | 226100 江蘇省南*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 凝結 芽孢 桿菌 檢測 引物 試劑盒 及其 方法 | ||
1.?一種凝結芽孢桿菌檢測的引物組，其特征在于，所述引物組以凝結芽孢桿菌CK基因為靶基因、基于環介導恒溫擴增技術設計的兩對引物：內引物FIP/BIP和外引物F3/B3，其核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1-4相同。
2.根據權利要求1所述的引物，其特征在于，所述兩對引物分別為：
外引物F3：TTTTGGCTCACGGAAGAG，
外引物B3：TGAACTGGCAGTCATACG，
內引物FIP：AGAACGCCTTCAAAATCGCACTT
TTAGCTTGAATTATTACGGGAC，
內引物BIP：AACTTTAATAAGGCACCGATTGT
GGTTTTATCTCGGGGATTTTGTCG。
3.?一種采用如權利要求1所述的引物組的凝結芽孢桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含：引物組、陽性對照品、LAMP反應液、Bst?DNA聚合酶和顯色液。
4.?根據權利要求3所述的凝結芽孢桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述引物組，包括內引物FIP/BIP和外引物F3/B3，其核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1-4相同，所述外引物和內引物添加的摩爾比為?1?:4～8。
5.?根據權利要求3所述的凝結芽孢桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照品為含有凝結芽孢桿菌的基因組?DNA。
6.?根據權利要求3所述的凝結芽孢桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述LAMP?反應液中含有?0.6～1.4mmol/L?dNTP，5～10?mmol/L?Mg2+，0.5～1.2mol/L?Betaine，10×Thermopol?Buffer。
7.?根據權利要求3所述的凝結芽孢桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述Bst?DNA聚合酶和顯色液為市售，顯色液為GeneFinder。
8.?一種如權利要求3所述凝結芽孢桿菌檢測試劑盒的凝結芽孢桿菌檢測方法，其特征在于：包括以下的步驟：
（1）提供待測樣品?DNA?；
（2）在?LAMP反應體系中加入所述引物組、LAMP反應液、BstDNA聚合酶，進行恒溫擴增反應后滅活；
（3）滅活后部分產物加入顯色液，觀察顯色結果，并同時對比陽性對照品的顯色結果，若顯色結果一致，說明待測樣品中含有凝結芽孢桿菌，若顯色結果不一致，則說明待測樣品中不含有凝結芽孢桿菌。
9.?根據權利要求8所述的凝結芽孢桿菌檢測方法，其特征在于：步驟（2）中，所述恒溫反應的溫度范圍為58℃，反應時間為80min。
10.根據權利要求8所述的凝結芽孢桿菌檢測方法，其特征在于：步驟（3）中，所述滅活的溫度為80℃，滅活時間為10min。
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