[發明專利]一種新的Gus染色液及其配制方法和應用

在審

• 申請號: 201410243265.4
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN104075927A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 王媛花;顏志明
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

1.一種新的Gus染色液配制方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)K₃[Fe(CN)₆]溶液和K₄[Fe(CN)₆]溶液的配制；

2)PBS磷酸緩沖液的配制：

3)染色液的配制方法：將5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯溶于甲醇，完全溶解以后，按順序依次加入：K₃[Fe(CN)₆]溶液、K₄[Fe(CN)₆]溶液、甲醇、10％的Triton-100(曲拉通)、PBS磷酸緩沖液。

2.根據權利要求1所述的一種新的Gus染色液配制方法，其特征在于，所述步驟1)中的K₃[Fe(CN)₆]溶液的濃度為50mM，所述K₄[Fe(CN)₆]溶液濃度為50mM。

3.根據權利要求1所述的一種新的Gus染色液配制方法，其特征在于，所述步驟2)PBS磷酸緩沖液的配制方法如下：配制A液：A液的組成是濃度為20mM，NaH₂PO₄·2H₂O溶液；配制B液：B液的組成是濃度為44.8mM，NaH₂PO₄·H₂O溶液；PBS磷酸緩沖液的配制方法是將配置好的38ml的A液和62ml的B液混合均勻配制而成。

4.根據權利要求1所述的一種新的Gus染色液配制方法，其特征在于，所述步驟3)中K₃[Fe(CN)₆]溶液加入量為1ml，K₄[Fe(CN)₆]溶液加入量為1ml，10％的Triton-100(曲拉通)加入量為1ml，PBS磷酸緩沖液加入量為77ml。

5.權利要求1所述的一種新的Gus染色液配制方法配制得到的新的Gus染色液。

6.權利要求5所述的新的Gus染色液在轉基因植物染色中的應用。

7.權利要求6所述的應用，其特征在于，將轉基因材料的需要檢測的組織浸泡于Gus染色液中，置于37℃的溫度下放置1-2小時，使染液充分滲入到組織的內部，然后脫色，倒出Gus染色液，用無水乙醇沖洗植物材料2-3次，再用70％的乙醇脫色24小時，期間更換乙醇2-3次；脫色完成以后拍照即可。