[發明專利]用于同時檢測海洋中四種致病菌的多重PCR引物及其設計方法

無效

• 申請號: 201410241775.8
• 申請日: 2014-05-30
• 公開（公告）號: CN103981275A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 楊季芳;管峰;陳吉剛;毛芝娟
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 張一平

技術領域

本發明屬于微生物檢測領域，具體涉及一種用于同時檢測海洋陰溝腸桿菌、產單核細胞增生李斯特菌、嗜水氣單胞菌和副溶血弧菌的多重PCR引物及其設計方法。

背景技術

陰溝腸桿菌、產單核細胞增生李斯特菌、嗜水氣單胞菌和副溶血弧菌，屬于可以通過食物、水進行傳播的病原菌。它們的生物學特性和致病性有一定的區別，但都可以引起食物中毒和消化系統疾病。

陰溝腸桿菌屬于條件致病菌，一般條件下不會引起致病，但也可引起敗血癥、下呼吸道感染、傷口感染、軟組織感染、心內膜炎、泌尿道感染等癥狀。陰溝腸桿菌能夠引起人類重視，主要是因為其可產生超廣譜β-內酰胺酶、AmpC酶，耐藥情況嚴重，并且具備多種其他耐藥機制，給臨床抗生素治療帶來新的挑戰。陰溝腸桿菌耐藥機制主要包括產生β-內酰胺酶、qnr基因介導耐藥、整合子、主動外排泵系統作用、藥物作用靶位的改變、外膜通透性改變等。這些復雜的耐藥機制存在，對于其他細菌混合性感染的抗生素治療造成無效或療效甚微。陰溝腸桿菌廣泛存在于自然界中，由其引起的海產品食物中毒偶有發生，但是在醫院中的傳播僅次于大腸桿菌和克雷伯菌。

產單核細胞增生李斯特菌是一種重要人畜共患病的病原菌。人感染后主要表現為敗血癥、腦膜炎和單核細胞增多等。該菌廣泛存在于自然界中，食品中存在的產單核細胞增生李斯特菌對人類的安全具有危險，在4℃的環境中仍可生長繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一。在歐美、日本由該菌造成的臨床疾病和食物污染問題，已超過在細菌性食物中毒中占第1位的沙門氏菌。我國多地也有該菌引發疾病而住院和死亡的報道。因為該菌是一種細胞內寄生菌，抗生素治療只能在一段時間內發揮作用，目前發現其耐藥性呈現散狀分布，對一些抗生素耐藥性不斷增強。

嗜水氣單胞菌廣泛分布于自然界的各種水體中，是多種水生動物的原發性致病菌，對人而言為條件致病菌，是典型的人-獸-魚共患病的病原菌。嗜水氣單胞菌可以產生毒性很強的外毒素，如：溶血素、組織毒素、壞死毒素、腸毒素和蛋白酶等，主要引起腸道性感染。嗜水氣單胞菌感染人的病例少有記載，但是一旦發作，死亡率很高，治愈率較低，常會與其它菌(如溫和產氣單胞菌、弧菌等)混合感染使病情加重。在我國也發生過多次由嗜水氣單胞菌引起的食物中毒。

副溶血弧菌對人和動物均有較強的毒力，其致病物質主要有耐熱性溶血素(TDH)和耐熱溶血相關毒素(TRH)，這些毒素具有溶血活性、腸毒性和致死作用。該菌因在含食鹽較濃(3％-4％以上)的培養基中生長，而在不含鹽的培養基內不能繁殖，故而又稱嗜鹽菌。副溶血弧菌在世界各地均有分布，通常存在于海岸線區域以及海產品中，人多因食用污染本菌又未經良好加工的海產品，如蟹類、牡蠣、蝦等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒，在沿海地區細菌性食物中毒中所占比例較高，是沿海區域最主要的食物中毒細菌之一。其引起的細菌性食物中毒危害僅次于沙門氏菌、大腸桿菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我國沿海地區每年都有大量由副溶血性弧菌引起食物中毒報道。