[發明專利]一種結核分枝桿菌雙相快速鑒別培養基及其應用

有效

• 申請號: 201410241566.3
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN103993065A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 薛慶節;閆迎春;聶尚丹;李秀真;章洪華;楊媛媛;胡文潔
• 申請（專利權）人: 濟寧醫學院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/68;C12R1/32
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 宋永麗

1.一種結核分枝桿菌雙相快速鑒別培養基，其特征在于：培養基的制備方法如下：

（1）固體培養基的制備：

a.稱取鹽酸吡哆醇1～5mg、谷氨酸鈉180～220mg、氯化鈣10～20mg、硫酸鎂15～25mg、檸檬酸鐵銨80～120mg、檸檬酸鈉180～220mg、硫酸銨380～420mg、丙酮酸鈉950～1050mg、氯化銅1～10mg、氯化鋅1～10mg、天門冬素1950～2050mg、磷酸二氫鉀15～25mg和磷酸二氫鈉15～25mg溶于蒸餾水600～700ml中，121℃加熱15～20分鐘，冷卻至20-25℃，得到固體培養基基礎液；

b.稱取中性甘油8ml、1%孔雀綠水溶液15ml和雞卵液1000ml加入步驟a所得固體培養基基礎液中，混合均勻，分裝于無菌培養管內，每管7～10ml；

c.將b步驟所得無菌培養管于80～90℃加熱10～20分鐘，冷卻至20-25℃，得到固體培養基，將固體培養基于4℃保存備用；

（2）液體培養基的制備：

a.稱取氯化鈣1～10mg、硫酸鎂5～15mg、油酸15～20mg、枸櫞酸鐵銨5～15mg、枸櫞酸鈉5～100mg、硫酸銨180～220mg、氯化銅1～10mg、氯化鋅5～15mg、丙酮酸鈉400～500mg、吐溫-80?0.5～1ml、天門冬素950～1050mg、磷酸二氫鉀950～1050mg和磷酸二氫鈉1750～1850mg溶于蒸餾水450～600ml中，121℃加熱15～20分鐘，冷卻至20-25℃，得到液體培養基基礎液；

b.稱取鹽酸吡哆醇0.15g、甘油5ml、酵母浸液4ml、過氧化氫酶0.2g、生物素0.15g、聚氧乙烯硬脂酸酯0.6g、牛血清白蛋白200g、酪蛋白消化物2g和分枝桿菌培養上清液5ml加入馬鈴薯汁500ml中，混合均勻，過濾除菌，得到促生長因子混合液；

c.將步驟a所得液體培養基基礎液與步驟b所得促生長因子混合液按體積比1:1混合均勻，得液體培養基混合液，向其中添加過濾除菌后的抑菌劑，得到液體培養基；

所述的抑菌劑為多粘菌素B、氨芐青霉素和兩性霉素B，且三者的質量與液體培養基混合液的質量體積比均為0.1mg/ml；

（3）將步驟（2）所得液體培養基加入步驟（1）所得固體培養基中，液體培養基與固體培養基的體積比為1：1～1：3，得到結核分枝桿菌雙相培養基；

（4）在結核分枝桿菌雙相培養基液體中加入噻吩-2-羧酸肼0.1ml或對硝基苯甲酸0.1ml，得到結核分枝桿菌雙相快速鑒別培養基。

2.如權利要求1所述的一種結核分枝桿菌雙相快速鑒別培養基，其特征在于：固體培養基的制備：

a.稱取鹽酸吡哆醇1mg、谷氨酸鈉200mg、氯化鈣20mg、硫酸鎂20mg、檸檬酸鐵銨100mg、檸檬酸鈉200mg、硫酸銨400mg、丙酮酸鈉1000mg、氯化銅5mg、氯化鋅5mg、天門冬素2000mg、磷酸二氫鉀20mg和磷酸二氫鈉20mg溶于蒸餾水650ml中，121℃加熱18分鐘，冷卻至20℃，得到固體培養基基礎液；

b.稱取中性甘油8ml、1%孔雀綠水溶液15ml和雞卵液1000ml加入步驟a所得固體培養基基礎液中，混合均勻，分裝于無菌培養管內，每管8ml；

c.將步驟b所得無菌培養管于85℃加熱15分鐘，冷卻，得到固體培養基，將固體培養基于4℃保存備用。

3.如權利要求1所述的一種結核分枝桿菌雙相快速鑒別培養基，其特征在于：液體培養基的制備中，液體培養基基礎液的制備步驟，具體如下：稱取氯化鈣5mg、硫酸鎂10mg、油酸18mg、枸櫞酸鐵銨10mg、枸櫞酸鈉50mg、硫酸銨200mg、氯化銅5mg、氯化鋅10mg、丙酮酸鈉450mg、吐溫-80?0.8ml、天門冬素1000mg、磷酸二氫鉀1000mg和磷酸二氫鈉1800mg溶于蒸餾水500ml中，121℃加熱18分鐘，冷卻至20℃，得到液體培養基基礎液。