[發明專利]B19病毒VP1獨特區蛋白構建病毒性腎病模型的應用

有效

• 申請號: 201410241521.6
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN104083753A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 聶曉晶;馬雷;丁曉華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區福州總醫院
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于病毒性腎病模型構建技術領域，涉及B19病毒VP1獨特區蛋白構建病毒性腎病模型的應用。

背景技術

1、病毒性腎病的研究現狀

病毒性腎病是一組因病毒感染而導致的腎臟疾病，常見的病原有乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、B19病毒、艾滋病病毒（HIV）等。國外報道B19病毒感染引起的病毒性腎病包括腎小球腎炎、腎病綜合征、腎功能不全等疾病。近來，B19病毒感染被認為與臨床表現重、治療效果差、病程進展快、預后差的塌陷性腎小球病（CG）密切相關，CG患者腎臟組織和外周血中B19病毒DNA檢出率分別為78%和87%。國內郝文等報道B19病毒感染是過敏性紫癜發病的重要原因之一，且B19病毒感染更易引起腎臟病變。余建莉等發現腎臟病患兒B19病毒感染陽性率明顯高于健康兒童，原發性腎臟病中急性腎小球腎炎B19病毒感染陽性率最高，繼發性腎臟病中狼瘡性腎炎B19病毒感染陽性率最高。王薇等發現B19病毒感染引起的腎臟疾病有自限性，其中女性患者較多。

目前研究認為病毒感染致腎臟病變的機制包括：①病毒蛋白或組織中的致炎因子引起腎臟細胞壞死、凋亡或功能障礙；②病毒抗原與腎小球直接結合，針對病毒抗原的免疫反應引起腎臟損傷；③循環系統中的抗原抗體免疫復合物損傷腎臟；④病毒對腎小球的直接破壞；⑤腎小管間質因細胞病變和腎小球產生的炎癥因子而損傷；⑥血流動力學紊亂；⑦抗病毒治療引起腎臟損傷。病毒感染導致腎臟病變涉及的信號通路主要有TNFR信號通路、Notch信號通路、GDNF／Ret信號通路。Komatsuda?A等認為B19病毒抗原刺激產生的抗體所形成的抗原抗體復合物是B19病毒感染引起腎臟損傷的原因之一。

2、?B19病毒及其致病性

人細小病毒B19(Human?Parvovirus?B19,??PVB19)是1975年Cossart?YE用對流免疫電泳法篩選健康獻血者血液中乙型肝炎病毒時于第19號標本中偶然發現的，因此得名。它是細小病毒科細小病毒屬中目前己知的唯一致人類疾病的病毒，也是動物病毒中體積最小結構最簡單的DNA病毒。1981年，在患鐮狀細胞貧血和再生障礙性貧血的兒童中檢測到這種病毒，從而證實了其致病性，以后又相繼在傳染性紅斑(又稱第五病)、血小板減少性紫癜、關節病、心肌炎、心包炎、急性肝炎患者中檢測到該病毒，而且還發現該病毒能通過胎盤感染胎兒，引起孕婦流產、早產或胎兒水腫、死胎。1987年在1例先天性免疫缺陷綜合征貧血病人中證實存在有慢性B19病毒感染。隨后的研究顯示在AIDS患者、器官移植的受者、化療的腫瘤病人等免疫抑制患者中都有慢性持續性B19病毒感染的存在。近年來，還證實B19病毒感染與川崎病、一過性成紅細胞減少、系統性紅斑狼瘡、皮肌炎、慢性自身免疫性血小板/中性粒細胞減少癥、某些嚴重的肝炎、由免疫復合物介導的腎臟損害及睪丸生殖細胞瘤等疾病有關，甚至可引起敗血癥。

B19病毒顆粒由兩個衣殼蛋白和一條線狀的單鏈DNA分子組成，呈對稱的二十面立體結構，無包膜，直徑22-24nm，平均23nm。在電鏡和陰性染色中可見空殼和完整的病毒顆粒，成熟的有感染力的病毒顆粒分子量為5.6×10⁶道爾頓，其中DNA占全重的一半。B19病毒基因為單鏈小DNA，全長5596bp，兩端有383bp長的重復序列形成復式發卡結構，G、C含量高，具有強同源性，是合成整條鏈的引物。兩端的復式發卡結構使得B19病毒基因二級結構牢固，而不易克隆入細菌中。在B19病毒基因組內有兩個大的開放讀框，幾乎延伸整個基因組，左側的開放讀框(406-2501bp)編碼非結構蛋白(NS)，右側的開放讀框編碼兩個衣殼蛋白VPl和VP2。VP2的氨基酸編碼序列(3088-5093bp)包含在VP1的氨基酸編碼序列(2416-5093bp)中，其組成比后者少226個氨基酸的氨基尾，故這兩種衣殼蛋白在氨基酸組成上具有同一性。